Морфология прокариотов (бактерий)






НазваниеМорфология прокариотов (бактерий)
страница1/10
Дата публикации17.03.2015
Размер1.36 Mb.
ТипДокументы
d.120-bal.ru > Биология > Документы
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   10
государственное бюджетное образовательное учреждение высшего

профессионального образования

«Северо-Осетинская государственная медицинская академия»

Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

КАФЕДРА МИКРОБИОЛОГИИ, ВИРУСОЛОГИИ И ИММУНОЛОГИИ

СБОРНИК МЕТОДИЧЕСКИХ РАЗРАБОТОК

ПО МИКРОБИОЛОГИИ, ВИРУСОЛОГИИ И ИММУНОЛОГИИ

ДЛЯ СТУДЕНТОВ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОГО ФАКУЛЬТЕТА

ВЕСЕННИЙ СЕМЕСТР

Владикавказ 2012
Под редакцией доктора медицинских наук, профессора, зав. каф. микробиологии ГОУ ВПО СОГМА Л.Я. Плахтий.

Авторский коллектив: к.м.н. Черткоева М.Г., к.м.н. Гатиева Е.И.


Основное назначение указаний – методическая помощь студентам к каждому практическому занятию в весеннем семестре. Указания составлены в соответствии с федеральной программой по микробиологии, вирусологии и иммунологии студентов 1 курса.

РЕЦЕНЗЕНТЫ:

Л.В. Бибаева –д.м.н., профессор, зав.кафедрой биологии с экологией ГОУ ВПО СОГМА Росздрава.

А.А. Подлужная – к.ф.н., доцент кафедры технологии лекарственных форм и организации фармацевтического дела ГОУ ВПО «Северо-Осетинский государственный университет им. К.Л. Хетагурова».
Лабораторная работа №1.
Тема: Морфология прокариотов (бактерий).
Учебная цель:

1. Изучить морфологию отдельных представителей бактерий.

2. Освоить технику микроскопирования.

3. Освоить простой метод окраски микроорганизмов.
Студент должен знать:

1. Устройство и оборудование микробиологической лаборатории, режим

работы и назначение.

2. Классификацию бактерий.

3. Строение микроскопа.

4. Методы микроскопического исследования.

5. Технику микроскопического исследования.
Студент должен уметь:

1. Приготовить мазок из чистой культуры, окрасить простым способом.

2. Микроскопировать с иммерсионной системой.

План занятия:

  1. Знакомство с правилами работы и основами техники безопасности в микробиологической лаборатории.

  2. Устройство и оборудование микробиологической лаборатории, режим работы и назначение.

  3. Классификация бактерий.

  4. Морфология бактерий, методы изучения (световая, темнопольная, фазовоконтрастная, электронная микроскопия).

  5. Этапы приготовления мазка.

  6. Простой метод окраски бактерий.

  7. Приготовление мазков из культуры стафилококка и кишечной палочки, окраска простым методом.

  8. Демонстрация препаратов из микрококков, диплококков, тетракокков, сарцин, стафилококков, стрептококков, кишечной палочки, бацилл, вибрионов.


Самостоятельная работа студентов

  1. Приготовление мазка и окраска простым методом (под руководством

преподавателя).

  1. Освоение техники микроскопирования. Микроскопическое изучение

морфологии бактерий:

  1. Просмотр демонстрационного мазка из чистой культуры стафилоккока

(Staphylococcus aureus). Окраска генциан-виолетом.

  1. Просмотр демонстрационного мазка из чистой культуры кишечной

палочки (E. coli). Окраска — водным фуксином.

  1. Оформление протокола исследования.


ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИЛ ПО ТЕМЕ

  1. Техника приготовления мазков.

Мазки готовят на обезжиренных предметных стеклах, предварительно обрисовав карандашом по стеклу место будущего мазка с противоположной стороны предметного стекла. При росте бактерий на жидкой питательной среде, материал берут стерильной бактериальной петлей, наносят на стекло и растирают над очерченной площадкой. В случае роста бактерий на плотной питательной среде, на предметное стекло предварительно наносят петлей каплю воды и материал растирают.

  1. Бактериальную петлю перед использованием с оставшейся культурой стерилизуют в пламени горелки. Приготовленный мазок высушивают на воздухе или держа высоко над пламенем спиртовки.

  2. После этого препарат фиксируют, для чего мазок стороной, где нет материала, троекратно проводят через середину пламени горелки. Фиксация позволяет убить микробы, прикрепить их к стеклу и, наконец, убитые микробы окрашиваются лучше, чем живые.


2. Техника простых методов окраски

Окраска бактерий преследует цель сделать их резко отличными от фона, что позволяет изучить под микроскопом их морфологию и структуру. В микробиологии используют простые и сложные методы окраски препаратов.

При ПРОСТОМ СПОСОБЕ окраски, мазок окрашивают каким-либо одним красителем, например, водным фуксином (2-3 мин.) или метиленовой синью (2-3 мин.), промывают водой, высушивают и микроскопируют.
3. Техника микроскопирования

В связи с очень малыми размерами бактерий изучение их морфологии возможно только при большом увеличении, достигаемом при помощи иммерсионного масла, которое позволяет создать единую систему между предметным стеклом и особым, х 90- кратным (с черной полоской) объективом.

При микроскопии окрашенных объектов необходимо создать яркое освещение с помощью вогнутого зеркала, поднятого конденсора и полностью открытой диафрагмы.

Каплю иммерсионного масла наносят на область мазка на стекле, лежащем на столе. Затем стекло переносят на столик микроскопа. Иммерсионный объектив погружают в масло осторожно, под контролем глаза до явного контакта объектива с маслом. Затем объектив поднимают, не выводя из капли масла и глядя в окуляр для нахождения объекта исследования («поля зрения»). Четкое изображение препарата достигается регулировкой сначала макровинтом (для обнаружения объекта), а затем микровинтом для регулировки резкости изображения.
Морфология основных форм бактерий

Известны четыре основные формы бактерий:

  1. Кокки- микробы округлой формы, имеющие в диаметре 1-2ц. Они отличаются между собой по взаимному расположению отдельных клеток, которое зависит от способа их деления. Если по окончании деления кокки разъединяются на отдельные шарики, получаются одиночные клетки кокков -Micrococcus.

  2. Группа из двух кокков носит название диплококка -Diplococcus (менингококк, гонококк имеют сходство с бобами, и ланцетовидную форму — пневмококк).

  1. Если деление кокков происходит лишь в одном направлении и образующиеся кокки не разъединяются, то получается нить из шариков в виде цепи, более или менее длинной в зависимости от числа кокков- Streptcoccus.

  2. При делении в двух взаимно перпендикулярых направлениях возникают сочетания по четыре кокка-Tetracoccus.

  3. Если деление происходит в трех взаимно перпендикулярных направлениях, кокки соединяются в виде пакетов (кубиков) и получают название — Sarcina.

  4. Делясь в различных направлениях без особой правильности, кокки образуют беспорядочные скопления клеток, напоминающие виноградные грозди, почему они и получили название Staphylococcus.

Палочковидные микроорганизмы представлены самой многочисленной и разнообразной группой бактерий. В классификации палочковидных форм принято именовать бациллами и клостридиями те палочки, которые способны образовывать споры, а палочки неспособные к спорообразованию, называются бактериями. Палочковидные формы различаются по величине, расположению — поодиночке, парами, цепочкой, беспорядочно и под углом. Очертанию концов — закругленные, обрубленные, утолщенные, заостренные.

Извитые формы-спириллы и спирохеты имеющие вид штопорообразно извитых клеток. К патогенным спириллам относятся возбудитель содоку (болезнь укуса крыс). К извитым также относятся кампилобактерии, имеющие изгибы как у крыла летящей чайки.

Спирохеты — тонкие, длинные, изогнутые (спиралевидной формы) бактерии, отличающиеся от спирилл подвижностью, обусловленной сгибательными изменениями клеток. Спирохеты представлены тремя родами патогенными для человека: Treponema, Borrelia, Leptospira.
Методы диагностики инфекционных заболеваний

  1. Микроскопический метод заключается в приготовлении препаратов (нативных или окрашенных простыми или сложными методами) из исследуемого материала и их микроскопии с применением различных видов микроскопической техники (световая, темнопольная, фазово-контрастная, электронная). В бактериологии микроскопический метод получил название бактериоскопический, в вирусологии — вирусоскопический.

  2. Культуральный метод заключается в посеве исследуемого материала на искусственные питательные среды с целью выделения и идентификации чистой культуры возбудителей. В бактериологии культуральный метод получил название бактериологического, а в вирусологии – вирусологического.

  1. Биологический метод (экспериментальный или биопроба) заключается в заражении исследуемым материалом чувствительных или других биологических объектов (куриные эмбрионы, культуры клеток). Его используют для выделения чистой культуры возбудителя, определения типа токсина, определение активности антимикробных химиотерапевтических препаратов.

  2. Серологический метод — заключается в определении титра антител в сыворотке крови больного, реже — в обнаружении микробного антигена в исследуемом материале. С этой целью используются реакции иммунитета.

  3. Аллергический метод заключается в выявлении инфекционной аллергии (ГЗТ) на диагностический микробный препарат — аллерген. С этой целью ставят кожные аллергические пробы с соответственными аллергенами.

Объект изучения медицинских микробиологических лабораторий — патогенные биологические агенты — патогенные для человека микроорганизмы (вирусы, бактерии, грибы, простейшие). В соответствии с типами микроорганизмов выделяют: бактериологические, вирусологические, микологические, протозоологические лаборатории. Регламентация условий работы с возбудителями инфекционных заболеваний произведена в соответствии со степенью опасности микроорганизмов для человека. Выделяют четыре группы возбудителей.

Группа 1: возбудители особо опасных инфекций: чума, натуральная оспа, лихорадки Ласса, Эбола.

Группа 2:возбудители высококонтагиозных бактериальных грибковых и вирусных инфекций: сибирская язва, холера, лихорадка, сыпной тиф, бешенство.

Группа 3: возбудители бактериальных грибковых, вирусных и протозойных нозологических форм (коклюш, малярия, полиомиелит, лейшманиозы).

Группа 4: возбудители бактериальных, вирусных, грибковых заболеваний (синегнойной инфекции, амебиаза, аспергиллеза).

Микробиологические лаборатории работают с ПБА с возбудителями особо опасных инфекций (группа 1и 2). Особый режим максимально изолированные индивидуальным и общественным риском.

ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ ПРОВЕРКИ ЗНАНИЙ

Укажите один правильный ответ:

1. С именем какого ученого связано открытие сущности брожения (1857), микробной обусловленности и заразности инфекционных болезней (1881), методов изготовления вакцин и способов профилактики куриной холеры, сибирской язвы и бешенства (1882-1885)?

а) Левенгук

б) Мечников

в) Кох

г) Пастер
2. Микроб — это:

а) доклеточное живое существо;

б) организм определённого вида;

в) одноклеточное существо, невидимое невооружённым глазом;

г) инфекционная белковая частица;

д) одноклеточный организм.
3. Бактерия — это:

а) вирус;

б) одноклеточное существо определённого вида, относящееся к прокариотам;

в) одноклеточное существо определённого вида, относящееся к эукариотам;

г) организм определённого вида;

д) одноклеточный организм.
4. Бациллы — это:

а) кокки, образующие споры;

б) палочки, не образующие спор;

в) палочки, образующие споры;

г) извитые формы.
5. Живой может считаться система, способная к:

а) обмену веществ с окружающей средой;

б) сохранению своей структурной организации;

в) умножению своих структурных компонентов;

г) воспроизведению и реализации генетической программы;

д) метаболизму.

Лабораторная работа №2.
Тема: Морфология прокариотов (бактерий).

Учебная цель:

1. Изучить отдельные структуры прокариотической клетки.

2. Освоить сложные методы окраски микробов.
Студент должен знать:

1. Особенность строения бактериальной клетки.

2. Функциональное значение различных компонентов прокариотической

клетки.

3. Сложные методы окраски (Грама, Циля-Нельсена, Ожешко, Бурри -Гинса,

Нейссера).
Студент должен уметь:

1. Приготовить мазок с чистой культуры бактерий E. coli, S. aureus и

окрасить по методу Грама.

2. Микроскопировать мазок.

3. Уметь приготовить препараты «висячей» и «раздавленной» капли.
План занятия:

  1. Строение и химический состав бактериальной клетки.

  2. Особенности строения бактериальной клетки.

  3. Сложные методы окраски, цели их использования (методы Грама, Циля-Нельсена, Ожешко, Гинса-Бурри, Нейссера).

  4. Демонстрация окрашенных препаратов по методам Грама, Бурри-Гинса, Нейссера, Ожешко, Цилю-Нильсену.

  5. Изучение подвижности бактерий, приготовление препаратов «висячая» и «раздавленная» капля.



Самостоятельная работа студентов

1. Приготовить смешанный мазок из чистых культур стафилококка и

кишечной палочки. Окраска водным фуксином.

2. Приготовить смешанный мазок из чистой культуры стафилококка и

кишечной палочки. Окраска по Граму.

3. Приготовить препараты «висячая» и «раздавленная» капля.

4. Оформление протокола исследования.
ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИЛ ПО ТЕМЕ

Техника сложных методов окраски

Сложные способы окраски включают последовательное нанесение на препарат красителей, различающихся по химическому составу и цвету, протрав и дифференцирующих веществ. Это позволяет предварительно дифференцировать микробы (дифференциально-диагностические способы) и выявлять определенные структуры клеток (специальные способы).
1. Способ окраски по Граму

Окраска по Граму является важным диагностическим признаком идентификации бактерий. В результате окраски по Граму все бактерии делятся на две группы; грам-положительные (синего цвета) и грам-отрицательные (красного цвета).

Техника окраски по методу Грама

1.Фиксированный мазок кладут на бактериологический мостик и покрывают полоской фильтровальной бумаги, пропитанной раствором генциан -виолета на бумажную полоску наносят воду. Через 2 минуты полоску удаляют.

2. Не промывая препарат водой, наносят раствор Люголя на 1 минуту. Затем раствор сливают.

3. Препарат обесцвечивают спиртом 20-30 секунд (до отхождения фиолетовых струек краски).

4. Препарат промывают водой.

5. Окрашивают водным фуксином — 2 минуты.

6. Препарат промывают водой.

7. Высушивают на воздухе или фильтровальной бумагой.
2. Способ окраски по Цилю-Нельсену

Применяется для обнаружения некоторых микробов, богатых липидам (например, возбудитель туберкулеза, лепры и др.)

1. Для окрашивания используют концентрированный раствор карболового фуксина Циля. С целью улучшения проникновения красителя в клетку препарат с наложенной на него полоской фильтровальной бумаги и красителем подогревают над пламенем горелки троекратно до появления пара.

2. Затем препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты, предварительно удалив фильтровальную бумагу.

3. Промывают водой.

4. Докрашивают метиленовым синим в течении 3-5минут.

5. Препарат промывают водой.

6. Высушивают на воздухе или фильтровальной бумагой.

Обесцвечивание кислотой приводит к потере красителя кислотоподатливыми микробами, и они окрашиваются в синий цвет. Кислотоустойчивые микробы остаются красными.
3.Способ окраски по Бурри-Гинсу

1. Смешивают каплю культуры капсульных бактерий с каплей туши на конце предметного стекла. Затем готовят мазок как обычно его готовят из капли крови.

2. Мазок высушивают на воздухе и фиксируют в пламени горелки.

3. Для обнаружения бактерий мазок окрашивают водным фуксином.

При этом способе окраски бактерии окрашиваются в красный цвет, а неокрашенные капсулы контрастно выделяются как ободок на черно-коричневом фоне вокруг бактерий.
4.Способ окраски по методу Нейссера

1. На фиксированный мазок наносят синьку Нейссера2-3 мин.

2. Не промывая водой, наносят раствор Люголя 10-30сек.

3. Мазок промывают водой.

4. Докрашивают раствором везувина — 1 мин.

В культуре дрожжеподобных грибов много зерен волютина. Они представляют собой соединения, имеющие, в отличие от цитоплазмы, щелочную реакцию и потому окрашиваются в темно-синий цвет. Цитоплазма клетки, обладающая кислой реакцией, воспринимает щелочной краситель везувин и окрашивается в желтый цвет.
5.Способ окраски по методу Ожешко

1. На нефиксированный мазок наносят 0,5% раствор HCI и подогревают на пламени горелки в течение 2 мин. До появления паров.

2. Препарат промывают водой, высушивают и фиксируют.

3. Докрашивают по методу Циля-Нельсена.

Споры бактерий после данной окраски приобретают красный цвет, а тело бактерий-синий.


ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ ПРОВЕРКИ ЗНАНИЙ

1. Если условно выбирать три главных функционально-структурных компонента бактерий, то это будут:

а) ядро, цитоплазма, оболочка;

б) ДНК, цитоплазматическая мембрана, включения;

в) клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, ядро;

г) оболочка, цитоплазма, ДНК;

д) рибосомы, цитоплазма, ядро.

2. В отличие от эукариотических клеток бактерии имеют:

а) гаплоидный набор хромосом;

б) диплоидный набор хромосом;

в) клеточный центр;

г) гистоновые белки.
3. Структурно цитоплазматическая мембрана бактерий отличается от мембран других живых существ тем, что:

а) является трёхслойной;

б) в её состав входит холестерин;

в) способна формировать эндоплазматическую сеть;

г) способна формировать мезосому;

д) способна формировать веретено деления.
4. Жёсткость структуры бактериальной клетки обеспечивается:

а) капсулой;

б) клеточной стенкой;

в) цитоплазматической мембраной;

г) жгутиками;

д) пилями.
5. Форма бактерий определяется строением её:

а) пилей;

б) цитоплазматической мембраной;

в) клеточной стенкой;

г) всех трёх компонентов;

д) неизвестно науке.

Лабораторная работа №3.
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   10

Добавить документ в свой блог или на сайт

Похожие:

Морфология прокариотов (бактерий) iconМорфология бактерий
Нобелевской премией за разработку клонально-селекционной теории антителогенеза награжден

Морфология прокариотов (бактерий) iconПрограмма практических занятий по общей микробиологии для студентов...
...

Морфология прокариотов (бактерий) iconЛекций по микробиологии для фармацевтического факультета
Вводная лекция. Предмет и содержание микробиологии, основные этапы развития науки. Значение для деятельности провизоров. Морфология...

Морфология прокариотов (бактерий) iconМетодические рекомендации для студентов к практическим занятиям по...
Тема: «Морфология обратимого и необратимого повреждения клеток и тканей: морфология нарушений углеводного и пигментного обмена. Морфология...

Морфология прокариотов (бактерий) iconМетодические рекомендации для студентов к практическим занятиям по...
Тема: «Морфология обратимого и необратимого повреждения клеток и тканей: морфология нарушений углеводного и пигментного обмена. Морфология...

Морфология прокариотов (бактерий) iconСанитарно-эпидемологическое значение иксодовых клещей как переносчиков...
Морфология иксодовых клещей. На территории СНГ зарегистрировано более 49 видов иксодовых клещей. Все они –временные эктопаразиты...

Морфология прокариотов (бактерий) iconКалендарно-тематический план лабораторно-практических занятий (3...
Патологическая анатомия: содержание, задачи, объекты и методы исследования. Морфология обратимого и необратимого повреждения клеток...

Морфология прокариотов (бактерий) iconКак происходит заражение?
Создаются условия для активизации других видов бактерий, а также для проникновения извне новых бактерий, вызывающих вторичную инфекцию...

Морфология прокариотов (бактерий) iconПрезентация «Роль бактерий в природе и жизни человека»
Цель: сформировать у учащихся знания о значении бактерий в природе и жизни человека

Морфология прокариотов (бактерий) iconЗанятие 3 смешанные дистрофии: морфология нарушений обмена пигментов...
Смешанные дистрофии: морфология нарушений обмена пигментов (гемоглобиногенных, протеиногенных, липидогенных)

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:


медицина


При копировании материала укажите ссылку © 2016
контакты
d.120-bal.ru
..На главную