Морфология прокариотов (бактерий)






НазваниеМорфология прокариотов (бактерий)
страница3/10
Дата публикации17.03.2015
Размер1.36 Mb.
ТипДокументы
d.120-bal.ru > Биология > Документы
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10
Тема: Физиология микробов. Принципы культивирования и идентификации микробов.
Учебная цель:

1. Освоить бактериологический метод диагностики инфекционных

заболеваний.

2.Изучить типы питания бактерий, принципы культивирования

микроорганизмов, классификацию питательных сред.

3.Изучить методику получения чистых культур бактерий из исследуемого

материала.
Студент должен знать:

  1. Принципы культивирования микроорганизмов.

  2. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний.

  3. Питательные среды, требования, предъявляемые к питательным средам

  4. Классификация питательных сред, состав и приготовление.


Студент должен уметь:

  1. Выполнить первый этап выделения чистой культуры аэробных бактерий.



План занятия:

  1. Питание бактерий: типы, механизмы поступления питательных веществ в микробную клетку.

  2. Принципы культивирования микроорганизмов.

  3. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний.

  4. Питательные среды: требования, предъявляемые к питательным средам; классификация, состав, приготовление.

  5. Демонстрация питательных сред.

  6. Посев исследуемого материала (взвеси микроорганизмов) на МПА методом Дригальского (1 этап).



Самостоятельная работа студентов:


  1. Посев исследуемого материала по методу Дригальского.

  2. Ознакомление с приготовлением питательных сред.


ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИЛ ПО ТЕМЕ

Микробиологическое исследование проводится с целью выделения чистых культур микроорганизмов, культивирование и изучения их свойств. Оно необходимо при диагностике инфекционных болезней, для определения видовой принадлежности микробов, в исследовательской работе, для получения продуктов жизнедеятельности микробов (токсинов, антибиотиков, вакцин и т. п.). Для выращивания микроорганизмов в искусственных условиях необходимы особые субстраты — питательные среды. Они являются основой микробиологической работы и определяют результаты всего исследования. Среды должны создавать оптимальные условия для жизнедеятельности микробов.

ТРЕБОВАНИЯ, ПРЕДЬЯВЛЯЕМЫЕ К СРЕДАМ:

  1. Должны быть питательными, т. е. содержать в легкоусвояемом виде все вещества, необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей микроорганизмов.

  2. Иметь оптимальную концентрацию водородных ионов.

  3. Быть изотоничными для микробной клетки.

  4. Быть стерильными.

  5. Быть влажными.

  6. Обладать определённым окислительно-восстановительным потенциалом.

  7. Быть по возможности унифицированными.

Потребность в питательных веществах и свойствах среды у разных видов микроорганизмов неодинакова. Это исключает возможность создания универсальной среды. Кроме того, на выбор той или иной среды влияют цели исследования.


Группа

классификации

Класс

Примеры

По составу

Простые

Жидкие — МПБ, пептон-ная вода Плотные — МПА



Сложные

Жидкие — сахарный бульон Плотные — сахарный агар, кровяной агар

По происхождению

Естественные

Молоко, свёрнутая сыворотка, срез сырого картофеля



Искусственные

Молочно-солевой агар Сывороточный агар Асцит-агар Кровяной агар



Синтетические

Среда Игла, среда 199

По назначению

Селективные (элективные)

-для стафилококка:

-для грам(-) кокков и

дифтероидов:

-для энтеробактерий:

-для холерного вибриона:

-для лактобацилл и грибов
Дифференциально-диагностические

Универсальные

Среды обогащения

Консервирующие


Молочно-солевой агар, жел-точно-солевой агар Сывороточные среды Среды с солями теллура Среды с солями желчных кислот

Пептонный бульон и щелочной агар

Томат-агар, рисовый агар, агар Сабуро


Эндо, Плоскирева, Левина, Ресселя, Гисса

МПБ, МПА, кровяной агар

Среда Мюллера

Среды с глицерином


По консистенции


Жидкие

Полужидкие

Плотные

МПБ, пептонная вода, сахарный МПБ

МПЖеле, желатиновая

МПА, кровяной агар



ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ
Укажите правильные ответы:

1. Какие питательные среды являются простыми?

а) среда Эндо;

б) МПА;

в) кровяной агар;

г) МПБ;

д) пептонная вода.
2. Плотность питательных сред зависит от содержания в них:

а) хлорида натрия;

б) пептона;

в) агар-агара;

г) сахарозы;

д) сыворотки крови.
3. На 1 этапе бактериологического метода исследования решаются следующие задачи:

а) идентификация чистой культуры микробов;

б) определение чувствительности к антибиотикам;

в) получение изолированных колоний;

г) определение вида микроба;

д) получение чистой культуры.
4.Преимущественный рост одних видов микробов при одновременном подавлении других можно получить на следующих видах питательных сред:

а) селективных (элективных);

б) простых;

в) сложных;

г) консервирующих;

д) дифференциально-диагностических;

е) универсальных.
5. В понятие «культуральные свойства» микроба входит:

а) характер роста на питательных средах;

б) макроскопическая характеристика колоний;

в) морфология микробных клеток при микроскопии;

г) ферментация углеводов на средах Гисса;

д) цвет пигмента колоний или культуры;

е) отношение возбудителя к окраске по Граму.

Лабораторная работа №6.
Тема: Физиология микробов. Принципы культивирования и идентификации микробов.

Учебная цель:

1. Освоить методы выделения чистых культур аэробов.

2. Изучить типы дыхания бактерий, способы создания условий анаэробиоза.

3. Освоить методы выделения чистых культур анаэробов.
Студент должен знать:

1.Принципы культивирования микроорганизмов.

2.Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний.

3.Питательные среды для культивирования анаэробов
Студент должен уметь:

1. Выполнить второй этап выделения чистой культуры аэробных бактерий.

План занятия:


  1. Типы дыхания бактерий.

  2. Способы создания условий анаэробиоза.

  3. Методы выделения чистой культуры аэробов и анаэробов.

  4. Посев почвенной болтушки на среду Китта-Тароцци.

  5. Питательные среды для анаэробов, методы культивирования и выделение чистой культуры анаэробов.

  6. Изучение культуральных свойств бактерий.

  7. Изучение колоний, выросших на чашках, засеянных методом Дригальского.

  8. Посев микроорганизмов из изученной колонии на скошенный агар для получения чистой культуры (2 этап).

  9. Демонстрация пигментообразования бактерий.

  10. Демонстрация характера роста бактерий на плотных и жидких питательных средах.



Самостоятельная работа студентов
1.Завершение 1-го этапа бактериологического метода. Изучение культуральных свойств бактерий.

2.Из выросших колоний на МПА приготовить мазок, окрасить по Граму.

3. Посев из исследуемых изолированных колоний на скошенный агар для

накопления чистой культуры.

4. Демонстрация техники анаэробного культивирования и сред для

анаэробов: высокий столбик агара, среда Китта-Тароцци, тиогликолевая,

Стюарта. Демонстрация микроанаэростата. Способы: Фортнера, Вейнберга.
ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИЛ ПО ТЕМЕ

Дыхание бактерий. Классификация бактерий по типу дыхания.

Сущность дыхания у микрорганизмов — получение энергии, образующейся в процессе прямого биологического окисления веществ кислородом или путем дегидрирования субстрата. Накопление энергии происходит в специальных структурах бактерий, называемых мезосомами.

В соответствии с потребностями в кислороде бактерии подразделяют на следующие основные группы:

1. Облигатные (строгие) аэробы- микроорганизмы, которые растут и размножаются только в присутствии кислорода. Например: Vibrio cholerae Pseudomonas aeriqinoza.

  1. Облигатные анаэробы — микроорганизмы, которые растут и размножаются только без доступа кислорода. Например: Clostridum botulinum, Clostridium te tani.

  2. Факультативные анаэробы — микроорганизмы, которые могут расти и размножатся как в присутствии кислорода, так и в бескислородных условиях. Например: Escherichia coli, Salmonella typhi.

  3. Микроаэрофилы бактерии — микрорганизмы, которые лучше растут и размножаются при повышенном содержании СО2 и низком содержании кислорода. Например: Helicobacter pylori, Campylobacter coli.


Методы культивирования анаэробов

Способы создания анаэробных условий

а) механический — удаление (откачивание) воздуха из анаэростата с помощью вакуумного отсоса. Затем анаэростат заполняют газовой смесью, которая состоит из 80% азота, 10% водорода и 10% углекислого газа;

б) химический — поглощение кислорода за счет химических веществ (щелочной раствор пирогаллола, двууглекислая сода);

в) биологический (метод Фортнера) — совместное культивирование анаэробов и аэробов. При этом на одну чашку Петри с плотной питательной средой (чаще используют среду Цейсслера) засевают культуру анаэробов, на другую — культуру аэробов, способных энергично поглощать кислород. В качестве аэробов используют культуру чудесной палочки (Serratia marcescens). Края чашки Петри парафинируют;

г) физико-химический — посев исследуемого материала на специальные среды для анаэробов, например, среды Китта-Тароцци и Вильсона-Блера (железо-сульфитный агар). Среды перед посевом регенерируют (кипятят на водяной бане в течение 15минут) для удаления кислорода.

Состав среды Китта-Тароцци:

-кусочки печени — для адсорбции кислорода;

-1% глюкозы — для осуществления анаэробного гликолиза;

-полужидкий агар — не допускает кислород в толщу среды.
Получение чистой культуры анаэробов

1. Метод Вейнберга (методразведений)

Для получения изолированных колоний анаэробов из среды Китта-Тароцци с ростом анаэробных бактерий забирают культуру пастеровской пипеткой с запаянным концом и последовательно опускают эту пипетку вначале в 3 пробирки с физиологическим раствором, а затем — 3 пробирки с растопленным полужидким сахарным МПА. После термостатирования при 370С в последних наблюдается рост изолированных колоний анаэробов.
2. Метод Перетца.

Одно из последних разведений по Вейнбергу в полужидком агаре выливают в крышку чашки Петри и закрывают ее дном так, чтобы удалить воздух. Края чашки Петри парафинируют. Посев исследуемого материала на среду Цейсслера секторами с последующим культивированием в анаэростате.

ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ ПРОВЕРКИ ЗНАНИЙ
Укажите все правильные ответы:

1. Для культивирования анаэробов без анаэростата используется среда:

а) кровяной агар;

б) желточно-солевой агар;

в) Эндо;

г) Китта-Тароцци;

д) Клауберга.
2. При анаэробном типе дыхании у бактерий отсутствует группа ферментов:

а) дегидрогеназ;

б) флавопротеинов;

в) цитохромоксидаз;

г) децитиназ;

д) нуклеаз.
3. Конечным акцептором электронов при аэробном типе дыхания у бактерий является:

а) молекулярный кислород;

б) неорганические соединения;

в) органические соединения;

г) одновременно органические и неорганические соединения;

д) митохондриальные белки.
4.Среда тиогликолевая служит для выделения:

а) облигатных аэробов;

б) облигатных анаэробов;

в) факультативных аэробов;

г) факультативных анаэробов;
5.Среда Китта-Тароцци служит для выделения:

а) облигатных аэробов;

б) облигатных анаэробов;

в) факультативных аэробов;

г) факультативных анаэробов;

Лабораторная работа №7.
Тема: Физиология микробов. Принципы культивирования и идентификации микробов.
Учебная цель: Освоить бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний.
Студент должен знать:

1. Этапы бактериологического метода диагностики.

2. Идентификацию чистой культуры по морфологическим, тинкториальным,

культуральным и биохимическим свойствам.

3. Питательные среды для изучения ферментативной активности.

4. Бактериофаги и их применение.

5. Классификацию ферментов.
Студент должен уметь:

1. Сделать посев исследуемого материала на среды Гисса и МПБ.

2. Определять антибиотикочувствительность методов стандартных дисков.

3. Проверить чистоту выделенной культуры.

План занятия:

  1. Ферменты, классификация. Ферменты, расщепляющие углеводы, белки,

жиры, ферменты патогенности. Питательные среды, используемые для

изучения ферментативной деятельности микроорганизмов.

  1. Проверка чистоты выделенной культуры макро- и микроскопически.

  2. Идентификация чистой культуры бактерий по морфологическим,

тинкториальным, культуральным, биохимическим, фаголизабельным

свойствам (3 этап).

  1. Бактериофаги, их применение для идентификации бактерий.

  2. Определения антибиотикочувствительности методом стандартных дисков.


Самостоятельная работа


  1. Приготовление мазка, окраска по Граму.

  2. Посев культуры на среды Гисса и МПБ.

  3. Определение антибиотикочувствительности.

  4. Демонстрация питательных сред для изучения ферментативной

активности микроорганизмов.

  1. Демонстрация феномена бактериофагии на плотных и жидких

питательных средах.

  1. Демонстрация выделения чистой культуры подвижных

микроорганизмов по методу Шукевича.
ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИЛ ПО ТЕМЕ
III этап исследования. Через 24 часа на скошенном МПА обнаружен однородный рост в виде сплошного налета желтоватого цвета. С целью проверки чистоты выделения культуры из пробирки приготавливают мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для оценки чистоты культуры необходимо просматривать не менее 10 полей зрения. Нахождение в мазках со скошенного МПА только гроздьевидно расположенных грамположительных кокков, свидетельствует о чистоте выделенных культур.

Для определения биохимических бактерий производят посев выделенной культуры в среды цветного ряда (глюкоза, лактоза, маннит, сахароза, мальтоза и в МПБ для определения индола и сероводорода), или определяют эти свойства с помощью Системы Индикаторных Бумажных дисков (СИБ).

Посевы помещают в термостат при температуре 37°С на 24 часа.
ферменты бактерий

Ферменты являются высокоспецифичными биологическими катализаторами, без которых невозможны жизнь и размножение. Большое количество реакций, происходящих при жизни бактериальной клетки, указывает на существование у бактерий значительного количества ферментов. Ферменты — вещества белковой природы с большим молекулярным весом. Некоторые из них относятся к протеинам, другие являются сложными белками. Они построены из двух частей белка и небелковой части, называемой простетической группой. В состав ее могут входить витамины. нуклеотиды, атомы железа и пр. Связь между белковой частью фермента и го простетической группой может быть прочной и непрочной. При наличии непрочной связи в растворах наступает диссоциация фермента и при этом может освобождаться свободная простетическая группа.

Легко диссоциирующие иростетические группы ферментов называются коферментами. Обычно ферменты подразделяются на следующие основные группы:

1. Оксидоредуктазы. все ферменты, катализирующие окислительно восстановительные реакции.

2. Трансферазы. катализирующие перенос тех или иных групп (например аминогрупп, фосфатных остатков и т. д.

3. Гидролазы, расщепляющие путем гидролиза Гт или иные соединения; к этому классу относятся также фосфатазы и дезампназы — ферменты, отщепляющие соответственно гидролитическим путем фосфат или аммонийные группы от различных органических соединений.

4. Лиазы, ферменты, отщепляющие от субстратов негидролитическим путем определенные группы (например, СОг, НгО, SH2 и т. д.).

5. Изомеразы, катализирующие внутримолекулярные перестройки в субстрате.

6. Лигазы (синтетазы) — класс ферментов, катализирующих присоединение друг к другу двух молекул с одновременным разрывом ппрофосфатной связи в трифосфатах (например, образующие С — О, С — N или С — S связи).

Наиболее высокой ферментативной активностью обладают сапрофиты; в меньшей степени это свойство выражено у патогенных бактерий. Изучение ферментов патогенных бактерий имеет исключительно важное значение, так как на основании определения ферментативной активности микробов можно дифференцировать различные виды и определять природу того или иного возбудителя заболеваний. Наряду с этим ферментативная активность микробов определяет патогенез и клиническую картину инфекционного заболевания.

Ферменты дифференцируют на экзо и эндоферменты. Экзоферменты выделяются клеткой во внешнюю среду, осуществляют процессы расщепления высокомолекулярных органических соединений на более простые, доступные для ассимиляции.

Ферменты бактерий подразделяются на конституитивные и индуцибельные. К первой группе относятся те ферменты, которые синтезируются бактериальной клеткой вне зависимости от того, на какой среде бактерия выращивается. Индуцибельные ферменты продуцируются данной бактерией лишь в ответ на действие специфического индуктора, присутствующего в среде.

ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ ПРОВЕРКИ ЗНАНИЙ
Укажите все правильные ответы:
1. Сахаролитические свойства микробов изучают на средах:

а) МПЛ, МПБ;

б) Гисса;

в) Ресселя;

г) кровяном агаре;

д) в тест-системе API;

е) в тест-системе Lachema.
2. Биохимическая активность микробов на плотных средах Гисса учитывается по:

а) изменению цвета среды;

б) образованию осадка;

в) образованию газа;

г) разрыву среды.
3. Протеолитические ферменты микробов изучаются на средах:

а) с углеводами;

б) МПБ;

в) молоком;

г) желатиной.




4. Ферменты в химическом отношении содержат:

а) субстрат;

б) апофермент;

г) кофермент;

д) метаболит
5. Основные цели применения дифференциально-диагностических сред:

а) изучение биохимической активности микробов;

б) изучения культуральных свойств микробов;

в) определения чувствительности к антибиотикам;

г) дифференциация различных видов микробов;

д) транспортировка материала в лабораторию.


Лабораторная работа №8

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10

Похожие:

Морфология прокариотов (бактерий) iconМорфология бактерий
Нобелевской премией за разработку клонально-селекционной теории антителогенеза награжден

Морфология прокариотов (бактерий) iconПрограмма практических занятий по общей микробиологии для студентов...
...

Морфология прокариотов (бактерий) iconЛекций по микробиологии для фармацевтического факультета
Вводная лекция. Предмет и содержание микробиологии, основные этапы развития науки. Значение для деятельности провизоров. Морфология...

Морфология прокариотов (бактерий) iconМетодические рекомендации для студентов к практическим занятиям по...
Тема: «Морфология обратимого и необратимого повреждения клеток и тканей: морфология нарушений углеводного и пигментного обмена. Морфология...

Морфология прокариотов (бактерий) iconМетодические рекомендации для студентов к практическим занятиям по...
Тема: «Морфология обратимого и необратимого повреждения клеток и тканей: морфология нарушений углеводного и пигментного обмена. Морфология...

Морфология прокариотов (бактерий) iconСанитарно-эпидемологическое значение иксодовых клещей как переносчиков...
Морфология иксодовых клещей. На территории СНГ зарегистрировано более 49 видов иксодовых клещей. Все они –временные эктопаразиты...

Морфология прокариотов (бактерий) iconКалендарно-тематический план лабораторно-практических занятий (3...
Патологическая анатомия: содержание, задачи, объекты и методы исследования. Морфология обратимого и необратимого повреждения клеток...

Морфология прокариотов (бактерий) iconКак происходит заражение?
Создаются условия для активизации других видов бактерий, а также для проникновения извне новых бактерий, вызывающих вторичную инфекцию...

Морфология прокариотов (бактерий) iconПрезентация «Роль бактерий в природе и жизни человека»
Цель: сформировать у учащихся знания о значении бактерий в природе и жизни человека

Морфология прокариотов (бактерий) iconЗанятие 3 смешанные дистрофии: морфология нарушений обмена пигментов...
Смешанные дистрофии: морфология нарушений обмена пигментов (гемоглобиногенных, протеиногенных, липидогенных)

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:


медицина


При копировании материала укажите ссылку © 2016
контакты
d.120-bal.ru
..На главную