Морфология прокариотов (бактерий)






НазваниеМорфология прокариотов (бактерий)
страница4/10
Дата публикации17.03.2015
Размер1.36 Mb.
ТипДокументы
d.120-bal.ru > Биология > Документы
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10
Тема: Физиология микробов. Принципы культивирования и идентификации микробов.

Сдача модуля по теме «Физиология микробов. Принципы культивирования и идентификации микробов».

Учебная цель:

1. Изучить методику выделения чистых культур бактерий из исследуемого

материала.

2. Изучить методы индикации вирусов, риккетсий и хламидий.
Студент должен знать:

1. Методы выделения чистых культур бактерий.

2. Способы заражения лабораторных животных, куриного эмбриона.
Студент должен уметь:

1.Сделать заключение по выделению чистой культуры микроорганизма.

2. Определить строение куриного эмбриона в овоскопе

3. Ввести исследуемый материал в аллантоисную полость куриного эмбриона

под контролем овоскопа.

4. Обнаруживать вирусные включения методом световой микроскопии.

5. Обнаруживать вирусные включения методом люминисцентной

микроскопии.


План занятия:

  1. Выделение чистой культуры аэробных и анаэробных бактерий (заключение).

  2. Культивирование риккетсий, хламидий, вирусов.

  3. Строение куриного эмбриона.

  4. Классификация клеточных культур.

  5. Способы заражения лабораторных животных, куриного эмбриона.

  6. Изменения, происходящие в организме зараженных животных, куриного эмбриона, тканевых культурах (цитопатическое действие).

  7. Методы индикации вирусов, риккетсий, хламидий.

  8. Сдача модуля.


Самостоятельная работа студентов:
IV этап исследования. Учет биохимических свойств.


глюкоза

лактоза

маннит

сахароза

мальтоза

индол

сероводород

К

К

К

К

К

+

-

  • к — кислота

ВЫВОД: из смеси бактерий выделена и идентифицирована Staphelococcus spp. на основании морфологических, тинкториальных (грамположительные, гроздьевидно-расположенные кокки) и культуральных (гладкие выпуклые колонии золотистого цвета) и биохимических свойств.


ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ ПО ТЕМЕ

Риккетсии и хламидии являются облигатными внутриклеточными паразитами. В отличие от вирусов размножаются простым делением и содержат оба типа нуклеиновой кислоты (ДНК и РНК) и многие ферменты, необходимые для энергетического и пластического метаболизма. По типу дыхания риккетсии относятся к аэробам, но в отличие от последних, активно окисляют глютаминовую кислоту и индифферентны к глюкозе. Наличие у риккетсий высокопроницаемой оболочки позволяет им получать из клеток, в которых они размножаются, необходимые ферменты и метаболиты.

Хламидии являются энергетическими паразитами клетки-хозяина, так как у них отсутствуют собственные энергодающие ферментные системы. Вследствие этого искусственные питательные среды даже самого сложного состава не могут удовлетворить потребности риккетсий и хламидий. Для их размножения необходимы живые, метаболизирующие клетки.

Для выделения и культивирования риккетсий и хламидий применяются тканевые культуры, куриные эмбрионы и восприимчивые лабораторные животные.

Вирусы выделены в отдельное «царство»-Viга. Они содержат только один тип нуклеиновой кислоты, не имеют клеточной структуры, не имеют самостоятельного обмена веществ, являясь внутриклеточными паразитами, репродукция вирусов осуществляется разобщенным способом.

По международной классификации все вирусы подразделяются по типу нуклеиновой кислоты на 2 подтипа - РНК- и ДНК-содержащие. Дальнейшее разделение вирусов проводится на основании размеров вирусов, типа симметрии при формировании капсидов, наличия или отсутствия внешних оболочек и количества содержащихся в них капсомеров.

ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ является основным и наиболее достоверным, позволяет выделить вирус из исследуемого материала с последующей его идентификацией. С целью накопления вирусосодержащего материала используются куриные эмбрионы и культуры тканей (искусственно культивируемые клетки той или иной ткани). Культуры тканей поддерживаются на естественных (среда 27, Эндерса) и синтетических (среда 199, Игла, Мельника-Риордана) питательных средах, приготовленных на основе растворов Хенкса и Эрла. Культивируются они в обычных пробирках, чашках Карреля, пробирках Барского.

Методика заражения куриного эмбриона

Существует несколько способов заражения куриного эмбриона. Чаще всего материал вводят в аллантоисную и амниотическую полости, на хорионаллантоисную оболочку и в желточный мешок. Перед заражением скорлупу яйца над воздушной камерой обрабатывают 70% спиртом, обжигают на пламени, смазывают 2% йодной настойкой, вторично протирают спиртом и обжигают.

При заражении в аллантоисную полость в скорлупе над воздушной камерой (границы которой заранее обводят карандашом при просвечивании яйца в овоскопе) проделывают небольшое отверстие с помощью ножниц или скальпеля. Туберкулиновым шприцем вводят 0,1-0,2 мл вируссодержащего материала на глубину 2-3 мм ниже границы воздушной камеры. Прокол в скорлупе заливают расплавленным парафином. Вскрытие зараженных эмбрионов производят в сроки максимального накопления вируса (через 48-72 ч инкубации при температуре 37 С) после обработки скорлупы спиртом и 2%

раствором йода ее рассекают и сбрасывают, снимают осторожно подскорлупную оболочку и рассматривают хорионаллантоисную оболочку вокруг места заражения на наличие очагов поражений (геморрагий, белесоватых очагов поражений).

Классификация клеточных культур:

первичные получают непосредственно из тканей животного и человека путем разрушения протеолитическими ферментами (трипсин, коллагеназа) межклеточного вещества. Разобщенные клетки, помещенные в питательную среду, способны прикрепляться к поверхности культурального сосуда и размножаться, образуя монослой - слой толщиной в одну клетку. С помощью специальных реактивов клетки можно снять с поверхности одного сосуда и пересадить в другой. Такая манипуляция называется пассажем. Первичные культуры выдерживают не более 5-10 пассажей.

  • перевиваемые (пассажные) клеточные культуры способны выдерживать неограниченное количество пассажей. Они происходят из опухолевых клеток, утративших дифференциацию и не имеющих ограничений роста.

  • полуперевиваемые (диплоидные) культуры - фибробластоподобные клетки, которые способны к быстрому размножению, выдерживают до 30-60 пассажей и сохраняют исходный набор хромосом.

Вирусы могут репродуцироваться только в клетках живого организма. В связи с этим вирусы культивируются путем заражения куриных эмбрионов или культур тканей, а также животных-сосунков.
Выявление (индикация) вирусов

Обнаружение вируса в курином эмбрионе

1.Гибель

2.Появление запаха при вскрытии

3.Помутнение жидкости в полости

4. Образование язвочек и кровоизлияний на оболочках

Биологический метод исследования заключается в заражении чувствительного к вирусу животного исследуемым материалом, изучении клинической и патологоанатомической картины заболевания. В рамках этого метода используются различные животные: обезьяны, кролики, морские свинки, собаки, мыши, крысы. Способы заражения: субдуральный, внутримозговой, интраназальный и другие.

Способы обнаружения вируса в организме лабораторных животных различаются в зависимости от вида животного и типа вируса.

Обнаружение вирусов в культуре клеток

Выявление по цитопатическому действию (ЦПД). ЦПД представляет собой дегенеративные изменения в клетках, которые появляются в результате репродукции в них вирусов.

Различают полную и частичную дегенерацию клеток монослоя.

При полной дегенерации, вызываемой, например вирусами полиомиелита, Коксаки и ЕСНО, клетки монослоя подвергаются значительным изменениям, большее их количество слущивается со стекла. Оставшиеся единичные клетки сморщены

Частичная дегенерация имеет несколько разновидностей:

  1. .По типу гроздьеобразования (аденовирусы);

  2. .По типу очаговой деструкции (оспа, грипп);

3.По типу симпластообразования (корь, паротит, парагрипп, герпес, ВИЧ).

Пролиферативный тип изменений характерен для некоторых онкогенных вирусов, трансформирующих клетки в злокачественные.

Внутриклеточные включения образуются при репродукции некоторых вирусов в цитоплазме и ядре клеток (оспы,бешенства, гриппа, герпеса и др.) Их обнаруживают при микроскопии после окраски монослоя по Романовскому - Гимзе, а также при люминесцентной микроскопии.

Цветная проба Солка. В результате жизнедеятельности клеток в питательной среде накапливаются кислые продукты. В результате этого цвет входящего в состав среды индикатора (фенолового красного) становится оранжевым. При заражении культуры клеток такими цитопатогенными вирусами, как энтеровирусы или реовирусы, метаболизм клеток подавляется, рН среды и ее цвет не меняются (среда остается красной).

Реакция гемагглютинации. В основе этой реакции лежит способность вирусов, содержащих рецепторы-гемагглютинины, «склеивать» эритроциты. Если есть гемаглютинины - РГА+(зонтик), если нет - РГА - (пуговка).

Реакция гемадсорбции. Механизм сходен с РГА.

ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ
1. Для микробиологической диагностики вирусных инфекций применяют следующие основных методических подхода

А) бактериологическая диагностика;

б) вирусологическая диагностика;

в) серологическая диагностика;

г) молекулярно-биологическая диагностика.
2. Вирусы размножаются только:

а) в живых системах;

б) на мясопептонном агаре;

в) на дифференциально-диагностических средах;
г) на элективных средах.
3. Первым этапом вирусологической диагностики является получение и подготовка

а) культур клеток;

б) куриных эмбрионов;

в) чувствительных лабораторных животных;

г) дифференциально-диагностических сред.
4. Выявляют вирусы:

А) По цитопатическому действию;

б) По образованию бляшек;

вПо цветной пробе;

г) По биохимическим свойствам.
5. Обнаруживают вирус в куриных эмбрионах

А) по изменению хорионаллантоисной оболочки;

б) РГА (Реакция агглютинации);

в РСК (Реакция связывания комплемента) ;

г) РП (Реакция преципитации).

Лабораторная работа №9
Тема: Экология микробов. Нормальная микрофлора организма человека.
Учебная цель:

1. Освоить закономерности синергизма и антагонизма в мире микробов.

2. Изучить нормальную микрофлору организма человека.
Студент должен знать:

1.Роль микробов в круговороте веществ в природе.

2.Этапы и факторы симбиоза человека с микробами.

3.Микрофлору тела человека.

4.Условия формирования ассоциации резидентов.

5.Отличия патогенов от резидентов.

6.Понятие: эубиоз, дисбиоз и дисбактериоз.
Студент должен уметь:

1. Проводить посев материала с пальцев рук на чашку с МПА (метод

отпечатков).

2. Взять мазок из зева и посеять на кровяной агар.
План занятия:

  1. Природные микробиоценозы. Экологические связи в микробиоценозах.

  2. Симбиоз, мутуализм, комменсализм, конкуренция, антогонизм, паразитизм.

  3. Роль микробов в круговороте веществ в природе.

  4. Этапы и факторы симбиоза человека с микробами.

  5. Условия формирования ассоциации резидентов.

  6. Как происходит регуляция резидентной микрофлоры?

  7. Отличия патогенов от резидентов.

  8. Состав резидентной микрофлоры кожных покровов человека.

  9. Нормальная микрофлора организма человека.

  10. Аутохтонная и аллохтонная микрофлора. Понятие об экотопах (стерильные и нестерильные экотопы организма).

  11. Какими методами можно изучать микрофлору человека?

  12. Факторы, оказывающие влияние на количественный и видовой состав микрофлоры организма человека.

  13. Понятия: эубиоз, дисбиоз и дисбактериоз.

  14. Медицинские иммунобиологические препараты для коррекции дисбиоза (пре-, про- и синбиотики).


Самостоятельная работа студентов

1.Изучить рост колоний на кровяном агаре.

2.Приготовить мазок из выросших колоний на кровяном агаре, окрасить его по

Граму, изучить под микроскопом.

3. Посев материала с пальцев рук на чашку с МПА (метод отпечатков).

4. Провести подсчет количества колоний микробов, выросших в отпечатках

кожи пальцев рук (отпечаток пальца немытого, вымытого с мылом и

обработанного спиртом).

5.Провести макроскопическое и микроскопическое изучение колоний,

выросших в отпечатках кожи пальцев рук.
ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ ПО ТЕМЕ

Микроорганизмы находятся в различных взаимоотношениях друг с другом. Совместное существование двух различных организмов называется симбиозом. Различают несколько вариантов полезных взаимоотношений: метабиоз, мутуализм, комменсализм, сателлитизм.

Антагонистические взаимоотношения выражаются в виде неблагоприятного воздействия одного вида микроорганизма на другой, приводящего к повреждению и даже гибели последнего. Формы антагонизма: конкуренция, хищничество, паразитизм.

Микрофлора организма человека

Организм человека заселен примерно 500 видами микробов, составляющими его нормальную микрофлору, в виде сообщества микроорганизмов (микробиоценоз). Они находятся в состоянии равновесия (эубиоза) друг с другом и организмом человека. Различают нормальную микрофлору различных биотопов: кожи, слизистых оболочек полости рта, верхних дыхательных путей, ЖКТ и мочеполовой системы. В организме выделяют постоянную и транзиторную микрофлору. Постоянная микрофлора представлена микроорганизмами, постоянно присутствующими в организме. Транзиторная микрофлора не способна к длительному существованию в организме. Постоянную микрофлору можно разделить на облигатную и факультативную. Облигатная микрофлора (бифидо-бактерии, лактобактерии, пептострептококки, кишечная палочка и др.) является основой микробиоценоза, а факультативная микрофлора (стафилококки, стрептококки, клебсиеллы, клостридии, некоторые грибы и др.) включает меньшую часть микробиоценоза. Микроорганизмы, составляющие нормальную микрофлору, заключены в высокогидратированный экзополисахаридномуциновый матрикс, образуя биологическую пленку, устойчивую к различным воздействиям.
Протокол исследования




Исследуемый

материал

Результаты

исследования

Графическое

изображение














ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ

1. Представителями резидентной микрофлоры кожи человека являются

а) стафилококки ;

б) стрептококки;

в) лактобактерии;

г) дрожжеподобные грибы.
2. У здорового человека стерильными являются следующие органы

а) почки;

б) матка;

в) бронхи, легкие;

г) желудок.
3.При ослаблении организма на коже возрастает количество

а) Гр – бактерий;

б) Гр + бактерий
4. Нормальная микрофлора тела человека выполняет следующие функции

а) защитную;

б) транспортную;

в) иммунную ;

г) дыхательную.
5. К полезным вариантам взаимоотношений между микроорганизмами относятся

а) метабиоз;

б) конкуренция;

в) комменсализм;

г) паразитизм.


Лабораторная работа №10

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10

Похожие:

Морфология прокариотов (бактерий) iconМорфология бактерий
Нобелевской премией за разработку клонально-селекционной теории антителогенеза награжден

Морфология прокариотов (бактерий) iconПрограмма практических занятий по общей микробиологии для студентов...
...

Морфология прокариотов (бактерий) iconЛекций по микробиологии для фармацевтического факультета
Вводная лекция. Предмет и содержание микробиологии, основные этапы развития науки. Значение для деятельности провизоров. Морфология...

Морфология прокариотов (бактерий) iconМетодические рекомендации для студентов к практическим занятиям по...
Тема: «Морфология обратимого и необратимого повреждения клеток и тканей: морфология нарушений углеводного и пигментного обмена. Морфология...

Морфология прокариотов (бактерий) iconМетодические рекомендации для студентов к практическим занятиям по...
Тема: «Морфология обратимого и необратимого повреждения клеток и тканей: морфология нарушений углеводного и пигментного обмена. Морфология...

Морфология прокариотов (бактерий) iconСанитарно-эпидемологическое значение иксодовых клещей как переносчиков...
Морфология иксодовых клещей. На территории СНГ зарегистрировано более 49 видов иксодовых клещей. Все они –временные эктопаразиты...

Морфология прокариотов (бактерий) iconКалендарно-тематический план лабораторно-практических занятий (3...
Патологическая анатомия: содержание, задачи, объекты и методы исследования. Морфология обратимого и необратимого повреждения клеток...

Морфология прокариотов (бактерий) iconКак происходит заражение?
Создаются условия для активизации других видов бактерий, а также для проникновения извне новых бактерий, вызывающих вторичную инфекцию...

Морфология прокариотов (бактерий) iconПрезентация «Роль бактерий в природе и жизни человека»
Цель: сформировать у учащихся знания о значении бактерий в природе и жизни человека

Морфология прокариотов (бактерий) iconЗанятие 3 смешанные дистрофии: морфология нарушений обмена пигментов...
Смешанные дистрофии: морфология нарушений обмена пигментов (гемоглобиногенных, протеиногенных, липидогенных)

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:


медицина


При копировании материала укажите ссылку © 2016
контакты
d.120-bal.ru
..На главную