Морфология прокариотов (бактерий)






НазваниеМорфология прокариотов (бактерий)
страница9/10
Дата публикации17.03.2015
Размер1.36 Mb.
ТипДокументы
d.120-bal.ru > Биология > Документы
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10
Тема: Физиологические механизмы иммунитета. Реакции иммунитета (агглютинации и преципитации).

Учебная цель:

1. Изучит физиологические механизмы иммунитета.

2. Изучить серологические методы лабораторной диагностики.
Студент должен знать:
1. Постановку реакции агглютинации (развернутая).

2.Постановку реакции преципитации, практическое применение.

3.Получение диагностических сывороток, классификацию.

Студент должен уметь:

1. Поставить ориентировочную реакцию агглютинации на предметном стекле.

2. Поставить развернутую реакцию агглютинации.

3. Поставить реакцию кольцепреципитации.

План занятия

  1. Антигены, их природа. Гаптены. Антигены бактерий.

  2. Антитела, классификация. Структура иммуноглобулинов, основные классы.

  3. Гуморальный и клеточный иммунный ответ

  4. Серологические реакции, их сущность и механизм, практическое применение. Серодиагностика. Сероидентификация.

  5. Реакция агглютинации, методы постановки, фазы реакций, практическое применение.

  6. Реакция преципитации, способы постановки, практическое применение.

  7. Диагностикумы, классификация, применение.

  8. Диагностические сыворотки, получение и виды диагностических сывороток – агглютинирующие (адсорбированные и неадсорбированные, моно- и поливалентные), преципитирующие.

  9. Демонстрация развернутой реакции агглютинации, реакции гемолиза.

  10. Постановка реакции кольцепреципитации.

  11. Демонстрация диагностикумов и диагностических сывороток.


Самостоятельная работа студентов:

  1. Постановка и учет ориентировочной реакции агглютинации на

предметном стекле с целью идентификации выделенной чистой культуры грамотрицательных палочек.

  1. Постановка и учет развернутой реакции агглютинации с целью

серодиагностики брюшного тифа.

  1. Постановка и учет реакции термокольцепреципитации с целью

сероиндикации сибирской язвы.
ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ

Под иммунитетом (от лат. immunitas — освобождение, избавление от чего-либо) в биологии и медицине понимают комплекс реакций организма, направленных на сохранение его структурной и функциональной целостности при воздействии на организм генетически чужеродных веществ, как поступающих извне, так и образующихся внутри организма.

Различают несколько основных видов иммунитета:

-Наследственный иммунитет (врождённый, видовой) обусловлен выработкой в процессе филогенеза генетически закрепленной невосприимчивости вида к данному антигену или микроорганизму.

-Приобретенный иммунитет специфичен и не передаётся по наследству. Он формируется естественно и создается искусственно. Естественный приобретенный иммунитет появляется после перенесённого инфекционного заболевания (оспа, корь и др.). Искусственный приобретенный иммунитет возникает при вакцинации.

Иммунитет бывает активный и пассивный. Активный иммунитет вырабатывается организмом в результате воздействия антигена на иммунную систему (например, при вакцинации). Пассивный иммунитет обусловлен антителами, передаваемыми от иммунной матери ребенку при рождении или путем введения иммунных сывороток, а также при пересадке иммунных клеток.

Активный иммунитет может быть гуморальным (обусловлен антителами), клеточным (обусловлен им-мунокомпетентными клетками) и клеточно-гумораль-ным (обусловлен и антителами, и иммунокомпетентными клетками). Например, антитоксический иммунитет к ботулизму и столбняку является гуморальным, так как он обусловлен антителами, циркулирующими в крови; иммунитет к лепре или туберкулезу — клеточный, а к оспе — клеточно-гуморальный.

Различают также иммунитет стерильный, сохраняющийся в отсутствие микроорганизма, и нестерильный, который существует только при наличии возбудителя в организме. Классическим примером нестерильного иммунитета является иммунитет при туберкулезе.

Отдельно выделяют так называемый местный иммунитет, который защищает отдельные участки организма, например, слизистые оболочки от возбудителей инфекционных болезней. Он формируется при участии секреторного иммуноглобулина А и характеризуется более активным фагоцитозом.

Антигены — это любые генетически чужеродные для данного организма вещества (обычно биополимеры), которые, попав во внутреннюю среду организма или образуясь в организме, вызывают ответную специфическую иммунологическую реакцию: синтез антител, появление сенсибилизированных лимфоцитов или возникновение толерантности к этому веществу, гиперчувствительности замедленного или немедленного типов, иммунологической памяти.

Антигены обладают специфичностью, которая связана с определённой химической группой в составе молекулы, называемой детерминантой, или эпитопом. Детерминанты антигена — это те его части, которые распознаются антителами и иммунокомпетентными клетками.

Различают полноценные и неполноценные (гаптены) антигены. Антигены, вызывающие полноценный иммунный ответ, имеющие 2 и более детерминанты, называются полноценными. Это органические вещества микробного, растительного и животного происхождения. Гаптенами могут быть химические вещества с малой молекулярной массой или более сложные химические вещества, не обладающие свойствами полноценного антигена: некоторые бактериальные полисахариды, полипептид туберкулёзной палочки (РРД), ДНК, РНК, липиды, пептиды. Гаптены из-за небольшой молекулярной массы не фиксируются иммунокомпетентыми клетками макроорганизма и не могут вызвать ответную иммунологическую реакцию. Полугаптены — неорганические радикалы (йод, бром, нитрогруппа, азот и др.), присоединившиеся к белковой молекуле, могут менять иммунологическую специфичность белка.

Антителообразование. В ответ на введение антигена иммунная система вырабатывает антитела — белки, способные специфически соединяться с антигеном, вызвавшим их образование и, таким образом, участвовать в иммунологических реакциях. Относятся антитела к у-глобулинам, т. е. наименее подвижной в электрическом поле фракции белков сыворотки крови. В организме у-глобулины вырабатываются особыми клетками — плаз-моцитами. В соответствии с Международной классификации у-глобулины, несущие функции антител, получили название иммуноглобулинов и обозначаются символом lg. Следовательно, антитела — это иммуноглобулины, вырабатываемые в ответ на введение антигена и способные специфически взаимодействовать с этим же антигеном.

Функции антител. Первичная функция антител состоит во взаимодействии их активных центров с комплементарными им детерминантами антигенов. Вторичная функция антител состоит из их способности:

- связывать антиген с целью его нейтрализации и элиминации из организма;

- участвовать в распознавании «чужого» антигена;

- обеспечивать кооперацию иммунокомпетентных клеток (макрофагов, Т- и В- лимфоцитов);

- участвовать в различных формах иммунного ответа (фагоцитоз, киллерная функция, иммунологическая толерантность, иммунологическая память, гиперчувствительность немедленного типа, гиперчувствительность замедленного типа).

Белки иммуноглобулинов по химическому составу относятся к гликопротеидам, так как состоят из протеина и сахаров; построены из 18 аминокислот. Различают 5 классов иммуноглобулинов: IqM, IgG, IgA, IgE,IgD. Иммуноглобулины М, G, А имеют подклассы. Например, IgG имеет четыре подкласса (IgGl, IgG2, IgG3, IgG4).

Иммунологической памятью называют способность организма при повторной встрече с одним и тем же антигеном реагировать более активным и более быстрым формированием иммунитета, т.е. реагировать по типу вторичного иммунного ответа.

Иммунологическая толерантность явление противоположное иммунологической памяти. В этом случае в ответ на повторное введение антигена организм вместо энергичной выработки иммунитета проявляет ареактив-ность, не отвечает иммунной реакцией, т. е. толерантен антигену.
I. Реакция агглютинации на предметном стекле

Нанести на предметное стекло на достаточном расстоянии друг от друга три капли: физиологического раствора, брюшнотифозной агглютинирующей сыворотки (№ 1) и дизентерийной агглютинирующей сыворотки (№ 2). Исследуемую культуру внести в каплю физиологического раствора и тщательно растереть в ней до появления выраженного помутнения. Бактериальной петлей подготовленную взвесь перенести в сыворотку № 1 и тщательно перемешать. Далее бактериологическую петлю необходимо простерилизовать прокаливанием. Затем взять бактериальной петлей материал из взвеси культуры в капле физиологического раствора и внести ее в каплю сыворотки № 2. Стекло слегка и осторожно покачивать для тщательного перемешивания. Учет результатов реакции производят спустя 1-2 минуты: в капле физиологического раствора сохраняется равномерное помутнение, тогда как в капле одной из сывороток отмечается агглютинация. Признаками агглютинации являются: выпадение зерен агглютината и просветление жидкости. В случае обнаружения в контрольной капле с физиологическим раствором спонтанной агглютинации результаты реакции не подлежат дальнейшему учету, а сама реакция требует повторной постановки.
II. Развернутая реакция агглютинации

Развернутая реакция агглютинации поставлена с целью определения титра антител в сыворотке крови больного.

Исследуемая сыворотка разводится физиологическим раствором в 50 раз, и полученное таким образом разведение (1:50) считается исходным. Далее исходное разведение сыворотки последовательно двукратно разводится физиологическим раствором. Для этого (см. схему постановки):

а) во все агглютинационные пробирки, кроме № 6, вносятся по 1,0 мл физиологического раствора;

б) в пробирку № 1 и № 6 вносится по 1,0 мл сыворотки в исходном разведении 1:50, и, таким образом, сыворотка в пробирке № 1 разводится еще вдвое, то есть в 100 раз;

в) 1,0 мл сыворотки из пробирки № 1 переносится в пробирку № 2 к имеющимся в ней 1,0 мл физиологического раствора, вследствие чего сыворотка разводится еще вдвое, то есть в 200 раз, и так далее, вплоть до пробирки № 5, где разведение достигает 1:1600;

г) очевидно, что в пробирках № 1 -№ 4 содержится по 1,0 мл сыворотки, тогда как в пробирке № 5 содержится 2,0 мл ее — избыточные 1,0 мл удаляются, и, таким образом, объемы в опытных пробирках № 1 — № 5 уравниваются. В пробирке № 6 осуществляется контроль сыворотки. Далее в каждую пробирку, за исключением пробирки № 6, вносят по 2 капли ДИАГНОСТИКУМА — обработанной формалином взвеси в физиологическом растворе клеток культуры Salmonella typhi, в каждом миллилитре которой содержится 2 миллиарда бактериальных тел. Штатив с пробирками встряхивают и помещают в термостат при t 37°С на 2 часа. После выдержки в термостате штатив с реакцией выдерживают при комнатной температуре или «на холоду» (+3° +5°С) в течение 18 часов.


Компоненты реакции

Опыт

сыворотки

диагностикума

1

2

3

4

5

6

7

1. Физ. Раствор

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

2. Исследуемая сыворотка (1:50); мл

1,0 1:100

1,0 1:200

1,0 1:400

1,0 1:800

1,0 1:1600

1,0 1:100

1,0

3. Диагностикум,

капли

2

2

2

2

2

-

2


Учет результатов производят через сутки в следующей последовательности: в первую очередь оценивают состояние контрольных пробирок (№6 и №7), во вторую очередь

  • опытных. В пробирке №6 (контроль сыворотки) должна быть абсолютно прозрачная, лишенная какого-либо осадка жидкость. В пробирке №7 (контроль диагностикума)

  • равномерное помутнение. Результаты опытных пробирок следует оценивать, начиная с пробирки с наибольшим разведением сыворотки (№5). Результат реакции учитывается по выпадению на дно пробирки хлопьев агглютината и одновременному просветлению содержимого пробирки; при легком постукивании по стенке пробирки или осторожном встряхивании агглютинат легко отделяется от дна, всплывает и, не изменяя своей структуры, возвращается в исходное положение.


III. Реакция кольцепреципитации

Реакция преципитации используется чаще всего для определения наличия в материале растворимых антигенов. В контрольную преципитационную пробирку, приблизительно до половины ее объема вносится нормальная сыворотка. В опытную пробирку вносится то же количество преципитирующей сыворотки. Далее в каждую пробирку вносится небольшое количество исследуемого материала — например, экстракта из шкуры животного (овцы), погибшей предположительно от сибирской язвы. Исследуемый материал следует вносить путем осторожного наслаивания на внутреннюю стенку преципитационной пробирки, удерживаемой в руке на высоте 30-35 см от поверхности рабочего стола под углом 45° к горизонтали.

В опытной пробирке на границе сыворотки и исследуемого материала наблюдается образование преципитата: белесоватого «диска», необратимо разрушающегося при встряхивании пробирки. В контрольной пробирке образования преципитата не наблюдается.
IV. Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РИТА)

РПГА основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности антигенами (эритроцитарный диагностикум), взаимодействие которых с соответствующими антителами сыворотки крови больных вызывает выпадение эритроцитов в осадок на дно пробирки (лунки) в виде «раскрытого зонтика».

Исследуемую сыворотку больного разводят в 10 раз и прогревают при 65°С 20 минут на водяной бане для удаления неспецифических гемагглютининов, затем готовят ряд ее разведений от 1:100 до 1:3200 и разливают в лунки по 0,5 мл. В каждую лунку добавляют по 0,5 мл диагностикума. В каждый ряд лунок добавляется соответствующий эритроцитарный диагностикум: к шигеллам Зонне, Флекснера, Ньюкастла и поливалентный сальмонеллезный.

Одновременно ставят контроли диагностикумов и контроль исследуемой сыворотки. Результат реакции учитывают после инкубации в термостате в течение 2 часов при 37°С или при комнатной температуре в течение 1824 часов. Реакция считается положительной при условии расположения эритроцитов в виде «зонтика» по всей поверхности дна лунки и оценивается как «+».
Схема постановки


Разведение

исследуемой сыворотки

диагностикумы

КОНТРОЛЬ



Зонне

Флекс-нер

Нью-кастл

Саль-мон. поливал.

Кд 1

Кд 2

Кд 3

Кд 4

Кс

1:100




























1:200




























1:400




























1:800




























1:1600




























1:3200




























Инкубация при t 370 C; 24 часа.

Учет

результатов





























ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ

1. Какие компоненты участвуют в реакции непрямой гемагглютинации?

а) антитела, антигены, комплемент;

б) антитела, антигены, физиологический раствор;

в) антигены, физиологический раствор;

г) антигены, эритроциты, антитела, физиологический раствор.
2.Какие компоненты участвуют в реакции преципитации?

а) корпускулярные антигены, антитела, физиологический раствор;

б) растворимые антигены, антитела, физиологический раствор;

в) антигены, антитела, комплемент;

г) антигены, антитела, эритроциты, физиологический раствор.
3.Какие компоненты участвуют в реакции торможения гемагглютинации?

а ) антигены, антитела, физиологический раствор;

б) антигены, антитела, комплемент;

в) корпускулярные антигены, антитела, физиологический раствор;

г) вирусы, эритроциты, антитела;

д) бактерии, эритроциты, антитела.
4.Дополнительным компонентом (кроме антигенов и антител), участвующим в реакции агглютинации является:

а) комплемент сыворотки морской свинки;

б) изотонический раствор NaCl;

в) эритроциты;

г) гемолитическая система.
5.Визуальный результат реакции агглютинации:

а) гемолиз эритроцитов барана;

б) задержка гемолиза эритроцитов барана;

в) просветление мутной среды реакции и образование крупнодисперсного (зернистого) осадка;

г) помутнение прозрачной среды реакции и образование мелкодисперсной взвеси (флоккулята) или кольца преципитации.



Лабораторная работа №17
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10

Похожие:

Морфология прокариотов (бактерий) iconМорфология бактерий
Нобелевской премией за разработку клонально-селекционной теории антителогенеза награжден

Морфология прокариотов (бактерий) iconПрограмма практических занятий по общей микробиологии для студентов...
...

Морфология прокариотов (бактерий) iconЛекций по микробиологии для фармацевтического факультета
Вводная лекция. Предмет и содержание микробиологии, основные этапы развития науки. Значение для деятельности провизоров. Морфология...

Морфология прокариотов (бактерий) iconМетодические рекомендации для студентов к практическим занятиям по...
Тема: «Морфология обратимого и необратимого повреждения клеток и тканей: морфология нарушений углеводного и пигментного обмена. Морфология...

Морфология прокариотов (бактерий) iconМетодические рекомендации для студентов к практическим занятиям по...
Тема: «Морфология обратимого и необратимого повреждения клеток и тканей: морфология нарушений углеводного и пигментного обмена. Морфология...

Морфология прокариотов (бактерий) iconСанитарно-эпидемологическое значение иксодовых клещей как переносчиков...
Морфология иксодовых клещей. На территории СНГ зарегистрировано более 49 видов иксодовых клещей. Все они –временные эктопаразиты...

Морфология прокариотов (бактерий) iconКалендарно-тематический план лабораторно-практических занятий (3...
Патологическая анатомия: содержание, задачи, объекты и методы исследования. Морфология обратимого и необратимого повреждения клеток...

Морфология прокариотов (бактерий) iconКак происходит заражение?
Создаются условия для активизации других видов бактерий, а также для проникновения извне новых бактерий, вызывающих вторичную инфекцию...

Морфология прокариотов (бактерий) iconПрезентация «Роль бактерий в природе и жизни человека»
Цель: сформировать у учащихся знания о значении бактерий в природе и жизни человека

Морфология прокариотов (бактерий) iconЗанятие 3 смешанные дистрофии: морфология нарушений обмена пигментов...
Смешанные дистрофии: морфология нарушений обмена пигментов (гемоглобиногенных, протеиногенных, липидогенных)

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:


медицина


При копировании материала укажите ссылку © 2016
контакты
d.120-bal.ru
..На главную