Факторы риска в развитии саркомы и миомы тела матки (молекулярно-эпидемиологический анализ)






Скачать 429.97 Kb.
НазваниеФакторы риска в развитии саркомы и миомы тела матки (молекулярно-эпидемиологический анализ)
страница1/3
Дата публикации13.06.2015
Размер429.97 Kb.
ТипАвтореферат
d.120-bal.ru > Документы > Автореферат
  1   2   3


На правах рукописи

БАРКОВ

Евгений Сергеевич



Факторы риска в развитии саркомы и миомы тела матки (молекулярно-эпидемиологический анализ)

14.00.14 – онкология

14.00.16 – патологическая физиология
А В Т О Р Е Ф Е Р А Т

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук


Томск – 2008

Работа выполнена в ГУ НИИ молекулярной биологии и биофизики СО РАМН (Новосибирск) и Новосибирском областном онкологическом диспансере (Новосибирск)

Научные руководители:

доктор медицинских наук С.Э. Красильников

доктор биологических наук, профессор Л.Ф. Гуляева

Официальные оппоненты:

д. м. н., профессор Д.Д. Цырендоржиев
д. м. н., профессор С.В. Сидоров

Ведущая организация: ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, г. Москва

Защита диссертации состоится «___» декабря 2008 г. в ____ часов на заседании диссертационного совета Д. 001.032.01 в ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН (634009, г.Томск, пер. Кооперативный, 5).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ онкологии Томского научного центра Сибирского отделения РАМН.

Автореферат диссертации разослан «___» _________2008 г.



Ученый секретарь

диссертационного совета, д.м.н. И.Г. Фролова

Общая характеристика работы


Актуальность темы. Злокачественные новообразования тела матки занимают 4-ое место в структуре онкологических заболеваний у женщин, уступая лишь раку молочной железы, толстой кишки и легкого, и остаются самой частой онкогинекологической патологией (Чиссов В.И. и др., 1998; Коломиец Л.А. и др., 2003; Чойнзонов Е.Л. и др., 2004). В России число вновь выявленных заболеваний женских половых органов составляет порядка 17% от числа всех злокачественных опухолей (Аксель Е.М. и Давыдов М.И., 2002). Одним из наиболее волнующих разделов онкологии являются злокачественные неэпителиальные и смешанные опухоли гениталий, или саркомы, которые сре­ди опухолей женского полового тракта составляют лишь 5%. Такая редкая встречаемость сарком создает до­полнительные трудности в их изучении и лечении. В связи с этим в настоящее время важен поиск молекулярных маркеров для улучшения диагностики, что расширит возможности выявления этих опухолевых заболеваний на ранних этапах, а также поможет внедрить новые методы лечения и профилактики.

На протяжение последних 20 лет во многих экономически развитых странах Европы и Северной Америки отмечается неуклонный рост заболеваемости опухолями органов репродуктивной системы у женщин: раком молочной железы, яичников, а так же саркомой тела матки и раком эндометрия. Считается, что такие тенденции к росту не могут быть объяснены только увеличением средней продолжительности жизни, а могут быть связаны с нарастанием в популяции таких «болезней цивилизации», как: ановуляция, хроническая гиперэстрогения, бесплодие, миома матки и генитальный эндометриоз (Максимов С.Я., 1994; Новикова Е.Г, Чулкова О.В. и др., 2004). Они сочетаются с метаболическими нарушениями (ожирение, гиперлипидемия, гиперинсулинемия, сахарный диабет), образуя по существу хорошо очерченный синдром системных нарушений в трех гомеостазах: репродуктивном, энергетическом и адаптационном (Дильман В.М., 1983; 1987).

Сведения о заболеваемости саркомами матки (СМ) как в России, так и во многих экономически развитых странах мира основываются преимущественно на данных крупных онкологических центров, так как канцер-регистра для дан­ной патологии не существует. В РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН ежегодно в среднем регистрируется 16 первичных больных СМ (Лазарева Н.И., Кузнецов В.В. и др., 2007). В ОГУЗ Новосибирском Областном онкологическом диспансере от 7 до 17 ежегодно. В мире на 1 млн. женского населения выявляется 8 случаев заболевания СМ (Трапезников Н.Н. и Аксель Е.М., 2001). По статистике в России СМ в среднем составляют 2-6% от всех злокачественных опухолей матки и менее 1% от всех онкогинекологических опухолей (Бохман Я.В. и Урманчеева А.Ф., 1996). Наиболее частые гистологические формы представлены леймиосаркомами, эндометриальными стромальными саркомами и карциносаркомами, причем различные гистотипы опухоли имеют свои возра­стные особенности: средний возраст больных леймиосаркомами 48-54 года, эндометриальными стромальными саркомами 41-63 и карциносаркомами 62-67 лет (Урманчеева А.Ф. и Ульрих Е.А., 2008).

В мире прослеживается схожая статистика, так саркома матки составляет менее 1% от всех гинекологических злокачественных опухолей и 3-5% от всех  злокачественных новообразований матки у европеоидной расы, однако у негроидной расы наблюдается увеличение до 10% (Termrungruanglert W., et al., 1997). Таким образом, заболеваемость для всех гистологических типов сарком выше у негроидной расы (7,0 случая на 100 000 женщин ежегодно), чем у европеоидной расы (3,5 на 100 000) (Brooks S.E. et al., 2004). На сегодняшний день причины таких расовых различий в заболеваемости саркомой неясны (Sherman M.E., Devesa S.S., 2003). Общая заболеваемость в США составляет 17,1 на 1 млн. женского населения (Schwartz S.M., Weiss N.S., 1990). Невысокая частота возникновения СЖГ и многообразие гистологических типов опухоли затрудняет проведение рандомизированных исследований, по­этому вопросы ранней диагностики и гистогенеза гинекологических сарком до сих пор остаются открытыми и, несмотря на значительные достижения послед­них лет в области канцерогенеза, весьма не просто обосновать долгосрочный прогноз и выбрать адекватный объем и тактику консервативной терапии.

С другой стороны, миома тела матки является одной из наиболее распространенных доброкачественных опухолей репродуктивной системы и встречается у 25 – 30 % женщин репродуктивного возраста (Andersen J., 1998). Биологическое своеобразие тканей матки состоит в том, что это гормоночувствительные ткани, очень динамичные по своей природе. Они обладают способностью не только циклически обновлять почти весь свой клеточный состав, но и чутко реагировать на все изменения гормональных влияний на уровне целого организма (Бохман Я.В., 1989). Присущая больным раком эндометрия, хроническая гиперэстрогения характерна и для многих больных с миомой матки. У женщин молодого возраста процесс возникновения опухолей в матке развивается на фоне снижения секреции половых стероидных гормонов всех классов: эстрогенов, прогестинов, андрогенов, а у пожилых отмечается четко выраженное повышение уровня эстрогенных гормонов. И, тем не менее, как молодым, так и пожилым больным с опухолями тела матки присуще нарушение равновесия между отдельными представителями половых стероидов, которое у пожилых выражено в виде сочетанной гиперэстрогенизации организма, проявляющееся повышением абсолютного уровня эстрадиола и относительного преобладания его над прогестинами (Сидоренко Ю.С. и др., 1996()ней маткии Чернышова А.Л., Крицкая Н.Г., Бочкарева Н.В. Клинико-морфо-биохимические аспекты гиперпластичес). У молодых женщин явление относительной эстрогенизации проявляется благодаря наиболее выраженному, в сравнении со всеми стероидами, снижению уровня андрогенных гормонов, сдвигу андрогенно-эстрогенного равновесия в сторону эстрадиола, а также в нарушении эстрогенно-прогестинового баланса.

Миома тела матки в некоторых случаях может являться фактором риска саркомы. По отношению ко всем гистотипам саркомы сочетание с миомой отмечается практически в 58 % случаев (Бохман Я.В. и Урманчеева А.Ф., 1996). Можно предположить, что в патогенезе некоторых гистотипов сарком, особенно развивающихся в миометрии и эндометрии, играют определенную роль эндокринно-обменные нарушения. Особое место в таких нарушениях занимает концентрация эстрогенов, которые играют важную роль в стимуляции клеточной пролиферации в органах-мишенях (Henderson I.C., Canellos G.P., 1990). И хотя о молекулярных механизмах действия стероидов накоплен большой экспериментальный материал, вопрос о том, как эти гормоны стимулируют пролиферацию в опухолевых клетках, пока остается открытым. Показана роль эстрогенов в активации рецепторов, принимающих участие в регуляции транскрипции многих генов, участвующих в клеточной пролиферации (Enmark E., Gustafsson J.-A.E., 1999). Все эти исследования объединяет тот факт, что необходимым условием запуска процессов трансформации в клетках-мишенях является увеличение содержания стероидов, в частности, эстрогенов. В последнее время появилась концепция локального синтеза эстрогенов в отдельных клетках, влекущего изменение содержания эстрогенов и, как следствие этого, усиление процессов пролиферации (Simpson E.R., 2003; Бочкарева Н.В. и др., 2005). Метаболизм эстрогенов in situ, включая их синтез и элиминацию, играет важную роль в росте и развитии многих опухолей человека, включая миому, рак тела матки, рак молочной железы и, возможно, саркому (Miller W.R., Sharpe R.M., 1998).

Вопрос о существовании взаимосвязи между особенностями метаболизма эстрогенов и риском возникновения саркомы и миомы матки все еще остается слабоизученным. Изучение и выявление нарушений в метаболизме эстрогенов позволит не только установить их роль в процессе опухолеобразования, но и в дальнейшем найти подходы к лечению.

В Новосибирской области исследований по выявлению факторов риска, в том числе и нарушению метаболизма эстрогенов, у больных саркомой тела матки не проводилось. Проведение эпидемиологических исследований в таких случаях помогает не только выявить основные факторы риска заболевания, но и также установить эстрогеновый статус женщины по таким показателям, как: возраст менархе, менопауза, количество родов и абортов. Одним из факторов усиления продукции эстрогенов является нарушение их метаболизма. Этому могут способствовать генетически детерминированные нарушения в активности ферментов. Таким образом, целесообразным представляется проведение комплексного молекулярно-эпидемиологического исследования женщин, больных саркомой тела матки, в сравнении с миомами матки.

Цель работы: провести сравнительный молекулярно-эпидемиологический анализ больных саркомой матки и миомой с оценкой ферментов метаболизма эстрогенов.

Для достижения цели решались следующие задачи:

1. Провести клинико-эпидемиологический анализ для выявления факторов риска развития саркомы и миомы тела матки у женщин Новосибирской области.

2. Оценить значимость аллельных и генотипических вариантов генов, кодирующих ферменты метаболизма эстрогенов: CYP1A2, CYP19 и SULT1A1 у больных саркомой тела матки и миомой матки.

3. Оценить экспрессию генов CYP19 и ERα в нормальных тканях матки и при опухолевых трансформациях.

Научная новизна работы

Впервые у женщин Новосибирской области проведен сравнительный клинико-эпидемиологический анализ факторов риска развития саркомы тела матки. Показано, что факторами риска являются поздний возраст менархе и менопаузы, отсутствие родов и бесплодие, наличие в анамнезе ожирения и сердечно-сосудистой патологии (ишемической болезни сердца и атеросклероза), отягощенной наследственности по онкологической патологии и сопутствующие заболевания половой сферы (воспалительные заболевания гениталий, гиперплазия эндометрия, эндометриоз и опухоли яичников).

Впервые у женщин Новосибирской области, больных саркомой тела матки, проведено исследование генетического полиморфизма ферментов метаболизма эстрогенов: цитохрома Р450 (CYP1A2, CYP19) и сульфотрансферазы (SULT1A1). Показано, что женщины с G аллелем гена SULT1A1 в Новосибирской области имеют повышенный риск развития как саркомы, так и миомы матки.

У женщин Новосибирской области, больных саркомой и миомой тела матки, впервые оценена экспрессия генов, принимающих участие в гормональном канцерогенезе, CYP19 и ERα. Показано, что профиль экспрессии гена ERα различается у женщин в пременопаузе и постменопаузе.
Научно-практическая значимость

На основании полученных данных показано, что целесообразно выделение групп риска по развитию саркомы и миомы тела матки у женского населения различных возрастных групп.

Использование анализа аллельных и генотипических вариантов гена SULT1A1 у больных с саркомой и миомы тела матки целесообразно в качестве дополнительного и объективного диагностического маркера.

Увеличение экспрессии генов CYP19 и ERα в тканях матки можно рассматривать, как молекулярный маркер развития онкологического заболевания матки у женщин в постменопаузе.


Основные положения, выносимые на защиту

  1. При анализе анамнестических данных у больных саркомой тела матки и клинического течения заболевания выявлены достоверные показатели отношения шансов риска связанные с возрастом, профессиональной деятельностью, возрастом менархе, отсутствием родов, ожирением, отягощенной наследственностью и наличием сопутствующих заболеваний. Большинство из этих факторов может косвенно свидетельствовать о возможной роли гормональных факторов в формировании опухолей.

  2. При исследовании генетического полиморфизма ферментов метаболизма эстрогенов у женщин, больных, как саркомой тела матки, так и миомой тела матки, в отличие от здоровых женщин, выявлено достоверное снижение частоты встречаемости мутантного аллеля сульфотрансферазы (SULT1A1).

  3. В опухолевых тканях саркомы и миомы матки регистрируется существенное усиление экспрессии гена ERα в постменопаузе при отсутствии изменений или уменьшении экспрессии в пременопаузе.



Апробация работы

Основные результаты работы были представлены и обсуждены на региональной конференции молодых ученых-онкологов «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2006); на I Сибирском съезде лимфологов с международным участием «Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфологии» (Новосибирск, 2006); на Российской научно-практической конференции с международным участием «Современные методы лечения онкологических больных: достижения и неудачи» (Барнаул, 2006г); на семинаре по теме: «Клиническая и биохимическая характеристика саркомы тела матки», проведенном в ГУ НИИ МББ СО РАМН; на научно-практической конференции «Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике», проведенной в Новосибирском Областном диагностическом центре (Новосибирск, 2007).

Публикации

Результаты исследования опубликованы в 7 печатных работах, отражающих основные положения диссертации, из них 2 - в изданиях, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 131 странице машинописной печати и состоит из введения, четырех основных глав: обзор литературы, материалы и методы, результаты, обсуждение результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 4 таблицами, 32 рисунками. Библиографический указатель содержит 125 источника, из которых 33 отечественных и 92 зарубежных.
Благодарности

Автор выражает искреннюю благодарность научным руководителям д.м.н. С.Э. Красильникову и проф., д.б.н. Л.Ф. Гуляевой., коллективу лаборатории молекулярных механизмов канцерогенеза ГУ НИИ МББ СО РАМН за помощь в проведении экспериментальных исследований и обсуждение полученных результатов, а также всему коллективу Новосибирского областного онкологического диспансера.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для ретроспективного анализа историй болезни использовались данные о 185 больных саркомой тела матки и 750 больных миомой тела матки, которые находились на лечении в гинекологическом отделении Новосибирского областного онкологического диспансера с 1985 по 2006 г. В качестве контрольной группы были выбраны 300 женщин, не имеющих гинекологической патологии, которые проходили плановый осмотр в гинекологическом отделении Центральной Районной больницы г. Искитима (Новосибирская область). Средний возраст в контрольной группе (I группа, n=300) составил 56,4 ± 10,4 лет (возрастные границы – от 39 до 78 лет); в группе больных миомой тела матки (II группа, n=750) – 46,1 ± 10,8 лет (от 28 до 69 лет); в группе больных саркомой тела матки (III группа, n=185) – 53,5±12,1 лет (от 27 до 79 лет); в группе больных саркомой тела матки в сочетании с миомой (IV группа, n=74) – 54,5 ± 12,2 лет (от 29 до 73 лет).

Диагноз устанавливали на основании общепринятых методов. Больные проходили клиническое и гинекологическое обследование, ультразвуковое сканирование и компьютерную томографию органов малого таза. По гистологической структуре опухоли в 60% случаев имела место лейомиосаркома, в 35% эндометриальная стромальная саркома, в 3% карциносаркома и в 2% смешанная мезодермальная опухоль. У всех больных проведено изучение анамнестических данных с акцентированием внимания на факторах риска развития миомы и СТМ. Полученные данные фиксировали в специально разработанных индивидуальных анкетах с анализом причин и условий возникновения патологического процесса, возраста, проф. вредности, менструальной и репродуктивной функций, конституционных особенностей, сопутствующих патологий. Для оценки избыточного веса и ожирения был использован показатель индекс массы тела (ИМТ) - вес/рост2 [кг/м2]. Нормальным ИМТ для женщины считался индекс, не превышающий 25 кг/м2, ИМТ в пределах от 25,1 до 29,9 кг/м2 – избыточный вес, ИМТ ≥30 кг/м2 – ожирение.

Для исследования генетического полиморфизма ферментов метаболизма эстрогенов суспензия клеток буккального эпителия женщин, больных миомой и саркомой тела матки, была получена у пациенток Новосибирского Областного онкологического диспансера. Суспензия клеток букального эпителия здоровых женщин была получена у женщин, которые проходили плановый осмотр в гинекологическом отделении Центральной Районной больницы г. Искитима (Новосибирская область). Группа исследования состояла из 35 женщин, страдающих саркомой тела матки, 172 женщин с миомой тела матки. 218 образцов, взятых от здоровых женщин, было использовано в качестве контрольной группы. Контролем служили женщины, не имеющие злокачественных патологий женских половых органов.

Для определения уровня экспрессии генов CYP19 и ERα использовали опухолевую ткань женщин, удаленную в ходе хирургического вмешательства (5 пациенток с диагнозом эндометриальная стромальная саркома, 10 пациенток с диагнозом леймиосаркома и 31 пациентка с диагнозом миома тела матки). В качестве контроля служила прилегающая к опухоли нетрансформированная ткань матки.

Все лица, участвующие в исследовании, дали письменное информированное согласие на участие в исследовании.

Геномную ДНК из буккального эпителия выделяли методом высоко-солевого осаждения белков (Salting-out protein method). Концентрацию выделенной ДНК измеряли спектрофотометрически. Амплификацию специфических участков генов CYP1A2, CYP19 и SULT1A1 проводили методом ПЦР, как ранее было описано в работе Mikhailova O.N. et al. (2006). Генотипирование проводили методом ПДРФ-анализа продуктов ПЦР специфических участков генома с использованием соответствующих ферментов рестрикции: CYP1A2 - эндонуклеаза рестрикции ApaI; CYP19 - эндонуклеаза рестрикции SfaNI; SULT1A1 - эндонуклеаза рестрикции HhaI.

Выделение РНК проводили гуанидин-фенольным методом (Chomczynski and Sacchi, 1987). Очистку РНК от примеси ДНК проводили с помощью ДНКазы (Promega) согласно инструкции производителя. Концентрацию выделенной РНК измеряли спектрофотометрически. Для синтеза кДНК in vitro брали по 1 мкг РНК на пробу. Относительное содержание мРНК CYP19 и ERα определяли методом мультиплексной ОТ-ПЦР (Wong et al., 1994). В качестве эндогенного внутреннего контроля, относительно которого проводилось выравнивание продуктов амплификации исследуемых генов, был выбран ген «домашнего хозяйства» GAPDH. ПЦР предварительно оптимизировали по числу циклов, концентрации Mg2+, количеству праймеров. Праймеры для амплификации гена «домашнего хозяйства» GAPDH (20 пкМ) были добавлены через несколько циклов. В наших условиях наиболее подходящее число циклов для CYP19 – 40, ERα – 39 и GAPDH – 24. Продукты ПЦР анализировали электрофорезом в 2% агарозном геле. Гель окрашивали бромистым этидием, сканировали с помощью видеосистемы «DNA Analyzer» (Москва) и денситометрировали с помощью программы ”Total Lab”. Относительное содержание мРНК CYP19 и ERα оценивали в относительных единицах как отношение интенсивности окрашивания специфической полосы генов к интенсивности полосы гена «домашнего хозяйства».

Статистическая обработка результатов проводилась с помощью программ Epi6 и SISA (http://home.clara.net/sisa/). В качестве критерия, определяющего, является ли исследуемый признак фактором риска заболевания, было использовано отношение шансов (odds ratio или ОШ). Для оценки достоверности различий между выборками использовался критерий Фишера. Наблюдаемое распределение генотипов проверяли на отклонение от равновесия Харди-Вайнберга. Статистическую обработку результатов исследования экспрессии генов проводили с помощью программ STATISTICA 6.0 и ORIGIN 6.0. Результаты представлены в виде M ± m, где М - среднее, m – ошибка среднего. Для оценки достоверности различий между выборками использовался t -критерий Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
  1   2   3

Добавить документ в свой блог или на сайт

Похожие:

Факторы риска в развитии саркомы и миомы тела матки (молекулярно-эпидемиологический анализ) iconРиск развития миомы матки снижается при увеличении числа родов и...
Сведения о миоме матки встречается в древних источниках, даже при исследовании останков египетских мумий были выявлены случаи кальцифицированных...

Факторы риска в развитии саркомы и миомы тела матки (молекулярно-эпидемиологический анализ) iconМолекулярно-генетический анализ факторов риска коронаросклероза и ишемической болезни мозга
«Молекулярно-генетический анализ факторов риска коронаросклероза и ишемической болезни мозга» 03. 00. 26 молекулярная генетика">

Факторы риска в развитии саркомы и миомы тела матки (молекулярно-эпидемиологический анализ) iconЛоуэн А. Психология тела: биоэнергетический анализ тела/Пер, с англ. С. Коледа
Лоуэн А. Психология тела: биоэнергетический анализ тела/Пер, с англ. С. Коледа — М.: Институт Общегума­нитарных Исследований, 2000...

Факторы риска в развитии саркомы и миомы тела матки (молекулярно-эпидемиологический анализ) iconФакторы риска, которые влияют на развитие ребёнка раннего возраста
Выявление у ребенка двух и более факторов риска значительно повышает риск возникновения у ребенка отклонений в развитии. Такой ребенок...

Факторы риска в развитии саркомы и миомы тела матки (молекулярно-эпидемиологический анализ) iconАлкоголизм и наркомания
Для начала родителям, озабоченным здоровьем своих детей, необходимо обратить внимание на врожденные факторы риска и способы общения...

Факторы риска в развитии саркомы и миомы тела матки (молекулярно-эпидемиологический анализ) iconПечатного издания
Анализ риска в ветеринарии: принципы и методология (анализ риска заноса ящура на территорию России) / Дудников С. А., Гусева Е. В....

Факторы риска в развитии саркомы и миомы тела матки (молекулярно-эпидемиологический анализ) iconПлеоморфные саркомы: морфология, молекулярно-биологические и клинические свойства (14.
Работа выполнена в фгбу «Российский научный центр рентгенорадиологии» Министерства здравоохранения РФ">
медицина


При копировании материала укажите ссылку © 2016
контакты
d.120-bal.ru