Российской Федерации Комитет по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга






НазваниеРоссийской Федерации Комитет по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга
страница9/13
Дата публикации06.04.2015
Размер1.17 Mb.
ТипДокументы
d.120-bal.ru > Документы > Документы
1   ...   5   6   7   8   9   10   11   12   13

5.2.2. Непрямые методы микробиологической диагностики (серологические методы)


Непрямые методы микробиологической диагностики ЛБ направлены на определение наличия и концентрации специфических антител в организме больного. Лабораторные тесты по выявлению антител к возбудителям, благодаря своей надежности, доступности и относительной простоты в техническом выполнении, остаются методами выбора в диагностике боррелиоза в настоящее время.

По мнению некоторых исследователей (Э.И.Коренберг, 1993) в России ежегодному серологическому обследованию на ЛБ должны быть подвергнуты не менее 200 000-250 000 человек, что в 25 раз больше, чем объем реально проводимых исследований.

Наряду с такими традиционно классическими тестами, как реакция иммунофлюоресценции (РИФ), реакция связывания комплемента (РСК), реакция непрямой гемагглютинации (РНГА), используются и относительно новые методы – иммуноферментный анализ и иммунный блотинг. Специфичность и чувствительность всех этих тестов различна, что порой вызывает необходимость использование их в комбинации.

На конечный результат при каждом серологическом исследовании до известной степени влияют особенности течения заболевания и выраженность антительного ответа у конкретного больного. Знания закономерностей антительного ответа на иммунодоминантные антигены боррелий необходимы в оценке результатов серологических исследований.

Антитела у больных ЛБ обнаруживаются обычно на 3-6 неделе от начала заболевания. Образование иммуноглобулинов класса M предшествует появлению IgG, иногда, в достаточно редких случаях, появление IgM отсрочено или они вообще не обнаруживаются на всем протяжении заболевания. Первичный иммунный ответ, на ранних стадиях развития болезни, происходит на несколько антигенов, в основном это компонент флагеллина (p41) и внешнего поверхностного белка OspC, и сопровождается появлением иммуноглобулинов обоих классов (IgM и IgG).

На ранних стадиях ЛБ достаточно часто регистрируются ложноотрицательные результаты. Уровень антител в крови больных повышается достаточно медленно, что является особенностью боррелиозной инфекции, а чувствительность серологических тестов не позволяет выявить в это время их низкое количество. В острой стадии, у пациентов с МЭ, антитела обнаруживаются у 20%-80% случаев, в зависимости от используемого серологического теста и длительности болезни. При безэритемной форме положительные результаты серологических тестов наблюдаются несколько чаще. По мере прогрессирования заболевания возрастает число сероположительных результатов исследований (IgM могут быть обнаружены почти в 90% случаев, IgG от – в 70%). Наиболее активно выработка антител класса IgG происходит при диссеминации возбудителей, а также у пациентов с хроническим течением ЛБ.

Важным условием серологического обнаружения антител является нормальный иммунный статус и способность иммунной системы больного отвечать адекватно на антигенный раздражитель. Отдельные случаи серонегативного ЛБ у больных с прогрессирующим течением заболевания и определенными клиническими проявлениями боррелиоза обусловлена во многом состоянием иммуносупрессии этих пациентов. Применение прямых методов диагностики ЛБ позволяет подтвердить у таких пациентов боррелиозную инфекцию.

Непрямая реакция иммунофлюоресценции (НРИФ).


НРИФ была разработана и предложена в клиническую практику для диагностики ЛБ одной из первых. До сегодняшнего времени этот лабораторный тест широко используется, в том числе и в России, оставаясь наиболее дешевым и доступным для широкого круга медицинских учреждений, не требующим особого оснащения лабораторий для его проведения.

В ходе реакции специфические антитела регистрируются в виде комплексов (антиген+специфическое антитело+сыворотка против глобулинов человека меченная флюоресцином) которые фиксируются на корпускулярном антигене и светятся в ультрафиолетовых лучах. Для исследования пригодны: сыворотка крови, ликвор, внутрисуставная жидкость. Использование поливалентных (против всех классов иммуноглобулинов) или специфических (против определенных классов иммуноглобулинов) антисывороток меченых ФИТЦ позволяет определять как общее количество специфических антител, так и антител определенных классов. Одновременное применение меченых флюоресцином сывороток против IgG и IgM повышает частоту обнаружения специфических антител незначительно (на 2-3%).

Чувствительность этой серологической реакции находится в пределах 40-50% при специфичности 96-98% (по некоторым данным до 80%). Данный уровень специфичности НРИФ позволяет принимать за положительный результат разведение сыворотки 1:40 и выше.

В качестве антигенов для НРИФ можно применять различные геновиды боррелий, относящихся к комплексу B.burgdorferi s.l. В России наиболее широко используется корпускулярный антиген Ip21(B.afzelii) производства НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи, который, до сих пор не стандартизирован.

Получение положительных результатов НРИФ во многом зависит от сроков заболевания. В первые 2-4 недели болезни, у пациентов с МЭ, подтвердить диагноз серологически удается только у трети больных. В последующие 1-3 месяца - еще примерно у 30%. Таким образом, при исследовании парных сывороток больных и переболевших, взятых с интервалом не менее 30 дней, ретроспективно удается подтвердить ЛБ в 60-70% случаев. Диагноз безэритемной формы ЛБ всегда требует лабораторного, в том числе и серологического, подтверждения, однако, учитывая особенности иммуногенеза при этом заболевании (отсроченное по времени нарастание титров антител), в ранние сроки заболевания (конец первого месяца) диагноз можно подтвердить приблизительно в 50% случаев протекающих без эритемы.

С помощью данного теста достаточно трудно оценить эффективность проведенного этиотропного лечения, т.к. даже после элиминации возбудителей титры специфических антител сохраняются на прежнем уровне относительно долго (от 3 до 6 месяцев). Часто у переболевших, у которых в начале заболевания результат НРИФ расценивался как отрицательный, затем регистрируется нарастание титров антител, что не связано с персистенцией возбудителей, а является результатом запаздывания иммунного ответа.
Комплементарно-ферментный тест (КФ-тест)

Для лабораторной диагностика ЛБ может быть использован КФ-тест, разработанный в лаборатории этиологических и патогенетических методов исследования НИИ детских инфекций (зав. лабораторией, проф. О.А.Аксенов). Метод основан на реакции РСК с окончательным тестированием результатов способом иммуноферментного анализа. КФ-тест позволяет определять антигены боррелий в исследуемом материале (ликвор, кровь, синовиальная жидкость), содержание и уровень активности специфических боррелиозных антител, общих и специфических иммунных комплексов в крови и ликворе. Преимуществом этого теста является количественная оценка результатов.

Специфичность этого теста в случае определения всех показателей достигает 80-83%.

Иммуноферментный анализ (ИФА).


Использование для ИФА очищенных антигенов боррелий, а также рекомбинантных антигенов обусловливает высокую степень специфичности теста.

ИФА имеет некоторое преимущество перед НРИФ, заключающееся в большем ее уровне чувствительности и возможности объективной оценки полученных результатов. Вместе с этим, следует отметить, что ИФА выигрывая в чувствительности у НРИФ, проигрывает последней в специфичности. Таким образом, в настоящее время именно эти реакции (НРИФ и ИФА) являются методами выбора для первого этапа пошаговой серологической диагностике ЛБ (см. далее).

Метод иммунного блотинга (Western-blot)


Метод Western-blot позволяет определить наличие специфических антител к определенным белкам возбудителя.

Метод Western-blot обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Преимущество метода состоит в определении наличия специфических антител к определенным антигенам возбудителя, а значит, можно получить точный ответ об участии отдельных антигенов в формировании иммунного ответа на конкретной стадии инфекционного процесса.
1   ...   5   6   7   8   9   10   11   12   13

Похожие:

Российской Федерации Комитет по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга iconРоссийской Федерации Комитет по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга
Лобзин Ю. В. – чл корр. Рамн, д м н., профессор, начальник кафедры инфекционных болезней Российской Военно-Медицинской академии

Российской Федерации Комитет по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга iconКомитет по здравоохранению распоряжение
Положения о Комитете по здравоохранению, утвержденного постановлением Правительства Санкт-Петербурга от 25. 12. 2007 n 1673, в целях...

Российской Федерации Комитет по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга iconРуководство Комитетом осуществляет председатель Комитета, назначаемый...
Комитет по здравоохранению (далее Комитет) является исполнительным органом государственной власти Санкт-Петербурга

Российской Федерации Комитет по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга iconИнформационный бюллетень Администрации Санкт-Петербурга №19 (770) от 28 мая 2012 г
...

Российской Федерации Комитет по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга iconИнформационный бюллетень Администрации Санкт-Петербурга №19 (770) от 28 мая 2012 г
...

Российской Федерации Комитет по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга iconОтчет
Вице-губернатор Санкт-Петербурга – руководитель Администрации Губернатора Санкт-Петербурга

Российской Федерации Комитет по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга iconОтчет
Вице-губернатор Санкт-Петербурга – руководитель Администрации Губернатора Санкт-Петербурга

Российской Федерации Комитет по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга iconКто организует и осуществляет призыв граждан на военную службу?
Санкт-Петербурга и осуществляют призывные комиссии, создаваемые на внутригородских территориях муниципальных образований города Санкт-Петербурга...

Российской Федерации Комитет по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга iconИнформационный бюллетень Администрации Санкт-Петербурга №6 (906) от 23 февраля 2015 г
Торжественно-траурные церемонии возложения цветов к Монументу героическим защитникам Ленинграда на пл. Победы и к мемориальным комплексам...

Российской Федерации Комитет по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга iconМедицина Петербурга
Конференция врачей Санкт-Петербурга и Северо-Западного Федерального округа Российской Федерации

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:


медицина


При копировании материала укажите ссылку © 2016
контакты
d.120-bal.ru
..На главную