Инструкция по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека кинетическим методом «а-амилаза uts»






Скачать 94.88 Kb.
НазваниеИнструкция по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека кинетическим методом «а-амилаза uts»
Дата публикации31.03.2015
Размер94.88 Kb.
ТипИнструкция
d.120-bal.ru > Водные виды спорта > Инструкция
ИНСТРУКЦИЯ

по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека кинетическим методом

«а-АМИЛАЗА - UTS»

Набор «а-АМИЛАЗА UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.

Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05459

Информация для заказа набора «а-АМИЛАЗА UTS»

Кат. №

Комплектация

Количество определений

АА-09-010-100

Реагент 100 мл

100/v

где v – объем фотометрической ячейки анализатора.


1. НАЗНАЧЕНИЕ


1.1. Набор реагентов «а-АМИЛАЗА -UTS» предназначен для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.

1.2. Альфа-амилаза относится к группе гидролаз, катализирующих гидролиз полисахаридов (крахмала, гликогена) до моно- и дисахаридов (мальтоза, глюкоза). Наиболее богаты амилазой поджелудочная железа и слюнные железы (Р-тип и S-тип), соответственно. Альфа-амилаза попадает в кровь вследствие цитолиза клеток, содержащих этот фермент, с мочой секретируется Р-тип амилазы [1,2,3]. На этом основано клиническое значение анализа.

1.3. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа, что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13.0001-2003.

2. ПРИНЦИП МЕТОДА


2.1. Альфа-амилаза катализирует реакцию гидролиза субстрата 2-хлор-4-нитрофенил-α-D-мальтотриозида (CNPG3) с образованием следующих соединений: 2-хлор-4-нитрофенола (CNP), 2-хлор-4-нитрофенил-α-D-мальтозида (CNPG2), мальтотриозы (М3) и глюкозы (G) по следующей схеме реакции:

10CNPG3 Амилаза 9CNP + CNPG2 + М3 + G




Скорость  образования  2-хлор-4-нитрофенола (CNP) пропорциональна  активности фермента и определяется фотометрическим методом при длине волны 405 нм [4].

2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны 405 нм молекулами 2-хлор-4-нитрофенола. Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски 2-хлор-4-нитрофенола и, следовательно, прямо пропорционально активности альфа-амилазы в анализируемом образце.

3. СОСТАВ НАБОРА


3.1. Набор реагентов поставляется в виде готового раствора реагента.

Реагент и его состав:

Состав

Концентрация


Буферный раствор MES, pH 6,0

50 ммоль/л

CNPG3

2,25 ммоль/л

NaCl

300 ммоль/л

Ацетат кальция

5,0 ммоль/л

Тиоцианат натрия

450 ммоль/л



4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ


4.1. Набор обеспечивает линейную область определения активности альфа-амилазы от 4,0 МЕ/л до 1600 МЕ/л, отклонение от линейности во всем указанном диапазоне не превышает 5%.

4.2. Чувствительность – не более 4 МЕ/л.

4.3. Воспроизводимость - коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.

4.4. Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам, аттестованным данным методом (CNPG3).

4.5. Для калибровки автоматизированных фотометрических систем рекомендуется использовать сывороточные калибраторы, аттестованные по значению активности альфа-амилазы данным методом (CNPG3).

4.6. Нормальные величины активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме взрослого человека составляют: 23-100 МЕ/л; в моче 10-490 МЕ/л [3].

4.7. Перечень лекарственных препаратов, влияющих на определение активности альфа-амилазы, приведены в обзоре [4].

5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ


5.1. Реагент содержит 2-хлор-4-нитрофенил-α-D-мальтотриозид и тиоцианат натрия. Следует избегать попадания реагента на кожу и слизистые. В случае попадания их на кожу и слизистые оболочки необходимо промыть поражённые участки большим количеством проточной воды.

5.2.  При выполнении лабораторного исследования необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).

5.3. При работе с биологическими пробами следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ


6.1. Для выполнения анализа по определению активности альфа-амилазы с применением набора реагентов «альфа-АМИЛАЗА-UTS» рекомендуется использовать полуавтоматический или автоматический биохимический анализатор, позволяющий выполнять измерение скорости изменения оптической плотности при длине волны 405 нм (кинетический режим) и обеспечивающий термостатирование фотометрической ячейки при температуре +(37±0,5) ОС.

6.2. Общелабораторное оборудование.

7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ


7.1. Негемолизированная сыворотка или плазма крови.

7.2. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов крови немедленно после взятия крови.

7.3. Образцы сыворотки или плазмы стабильны 7 суток при комнатной температуре, 1 месяц при

+(2-8) ОС, образцы не замораживать [3].

7.4. Образцы мочи стабильны не более 24 часов при +(2-8) ОС, не замораживать [3]. Проверьте уровень pH. Моча с pH < 5 может приводить к снижению стабильности фермента.


8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА


8.1. Реагент готов к использованию.

8.2. Реагент перед применением необходимо прогреть до температуры +(37±0,5) ОС.

8.3. Оптическая плотность реагента при 405 нм должна составлять не более 0,2 ед. опт. плотн. (Б), (при использовании кювет с длиной оптического пути 10 мм).

8.4. Для проведения анализа на полуавтоматическом анализаторе должен быть выбран кинетический режим измерения с калибровкой по фактору и установлены следующие значения параметров методики:

Параметр

Значение

Имя теста

Амилаза

Основной светофильтр

405

Дополнительный светофильтр

600

Фактор сыворотка, плазма крови, мочи, F

3367*

Время лаг-фазы

1 мин.

Время измерения

1-3 мин не менее 3 измерений.

Единицы измерения

Е/l, МЕ/л

Линейность, МЕ/л

5,0 - 1600


* значение F приведено для случая, когда в анализаторе используются кюветы или пробирки с оптическим путем L0=10мм. При использовании кювет или пробирок с иным оптическим путем (L1) следует приведенное значение изменить и установить следующее значение фактора: F1=FохL0/L1

  • Проведение реакции.

8.5. Отобрать компоненты реакционной смеси с использованием пипеточных дозаторов в объемах, указанных в таблице:

Внести в кювету

Анализируемый образец, мкл

Реагент

1000

проба

20

8.5.1. При использовании биохимических анализаторов с другим фотометрическим объемом количество реагента и анализируемых образцов в зависимости от объема используемой кюветы может быть пропорционально изменено (соотношение пробы к реагенту составляет 1:50)

8.5.2. Пробы перемешать, поместить в фотометрическую ячейку анализатора. На стадии лаг-фазы в течение 1 минуты скорость изменения концентрации альфа-амилазы выходит на линейный режим. Далее измерения оптической плотности провести не менее 3 раз (в течение 1-3 мин) через равные промежутки времени.

8.5.3. Результат анализа - активность альфа-амилазы - рассчитывается автоматически при введении в память полуавтоматического биохимического анализатора фактора, указанного в таблице.

8.5.4. Если результат определения активности альфа-амилазы превышает 1600 МЕ/л, то следует разбавить пробу физраствором (0,9% NaCl) в 2 раза и повторно провести измерение, а полученный результат умножить на 2.

8.6. Для выполнения измерения на автоматическом биохимическом анализаторе следует:

8.6.1. Установить программу определения активности альфа-амилазы согласно таблице:

Наименование параметра

Значение

Метод измерения

кинетический

Длина волны, нм

основная 405, дифференциальная 600

Измерение против

Воздух или дист. вода

Температура реакции

37 ОС

Единица измерения

Е/л, (МЕ/л)

Число знаков после запятой

0

Изменение оптической плотности

Увеличивается

Фактор*

Зависит от длины оптического пути

Соотношение реагент/проба (сыворотка или плазма)

50:1

Соотношение реагент/проба (моча)

100:1

Количество измерений, не менее

3

Время лаг-фазы, мин

1

Время реакции, мин

1

Верхний предел абсорбции реагента против воды, Б

0,2

Нижний предел абсорбции реагента против воды, Б

0

Максимальная скорость изменения абсорбции, Б/мин

0,15

Границы линейности, МЕ/л

5-1600

Максимум нормы, МЕ/л

100

Минимум нормы, МЕ/л

23

* - Перед первым использованием набора необходимо определить значение фактора по мультикалибратору, аттестованному по активности альфа-амилазы методом с использованием CNPG3, полученное значение ввести в память анализатора.

8.6.2. Если результат измерения активности альфа-амилазы выше 1600 МЕ/л, следует разбавить пробу физраствором (0,9% NaCl) в 2 раз, повторно провести измерение, полученный результат умножить на 2.

9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА


9.1. Набор реагентов «а-АМИЛАЗА-UTS» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2-8 ОС в течение всего срока годности. Допускается хранение набора до 25 ОС не более 10 суток. Замораживание реагента не допускается.

9.2. Срок годности набора 18 месяцев с даты его изготовления.

9.3. Реагент после вскрытия флакона может храниться при температуре +2–8 ОС в темном месте в течение всего срока годности набора.

9.4. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
Список литературы

1. McNeely M. Amylase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1112-1116.

2. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.

3. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.

4. Ying Foo A et al. Amilase measurement with 2-chloro-4nitrophenyl.

5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Производится ООО «Эйлитон» по заказу ЗАО «А/О Юнимед».

По вопросам, касающимся качества набора «а-АМИЛАЗА –UTS», следует обращаться в ЗАО «А/О ЮНИМЕД» по адресу: 129301, Москва, ул. Касаткина, 3а; Тел. (495) 734-91-31, 8-800-333-91-31,

Факс: (495) 564-86-41;

E-mail: office@unimedao.ru; http://www.unimedao.ru



Добавить документ в свой блог или на сайт

Похожие:

Инструкция по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека кинетическим методом «а-амилаза uts» iconИнструкция по применению набора реагентов для диагностики бактериального...
Днк gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, Lactobacillus spp и общего количества бактерий) в клиническом материале методом полимеразной...

Инструкция по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека кинетическим методом «а-амилаза uts» iconХолинэстераза диаВетТест Набор ветеринарных диагностических реагентов...
Набор ветеринарных диагностических реагентов для определения активности холинэстеразы в крови животных

Инструкция по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека кинетическим методом «а-амилаза uts» iconR1: Good’s буфер, моль/л pH 7,15 0,1 NaCl, ммоль/л 62,5 MgCl2, ммоль/л...
Присутствующая в крови амилаза выводится через почки и экскретируется в мочу. Следовательно, увеличение сывороточной активности отражается...

Инструкция по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека кинетическим методом «а-амилаза uts» iconАспартатаминотрансфераза диаВетТест Набор ветеринарных диагностических...
Аст в сыворотке крови. Для дифференциальной диагностики большое значение имеет коэффициент Ритиса = аст/алт. В норме коэффициент...

Инструкция по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека кинетическим методом «а-амилаза uts» iconКомпоненты и их концентрации в реак­ционной смеси
Присутствую­щая в крови амилаза выводится через почки и экскретируется в мочу. Следовательно, уве­личение сывороточной активности...

Инструкция по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека кинетическим методом «а-амилаза uts» iconКреатинин продукт обмена веществ, выделяемый почками, главным образом,...
Клиренс креатинина позволяет оценить скорость гломерулярной фильтрации, что позволяет лучше диагностировать почечные заболевания...

Инструкция по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека кинетическим методом «а-амилаза uts» iconЧто делать если у Вас кровь в моче?
При появлении крови в моче безотлагательно необходимо обратиться к урологу и срочно пройти тщательную диагностику для выявления причины...

Инструкция по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека кинетическим методом «а-амилаза uts» iconГлюкоза диаВетТест
Набор ветеринарных диагностических реагентов для определения содержания глюкозы в крови животных

Инструкция по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека кинетическим методом «а-амилаза uts» iconДиаВетТест Набор ветеринарных диагностических реагентов для определения...
Определение креатинкиназы используется в диагностике и мониторинге инфаркта миокарда и миопатий. Увеличение активности кфк может...

Инструкция по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека кинетическим методом «а-амилаза uts» iconБелайхун Кибрет аутоантитела к ДНК в сыворотке крови больных геморрагической...
Для большинства аутоиммунных заболеваний (аиз) характерно повышение содержания в сыворотке крови аат к нативной и (или) денатурированной...

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:


медицина


При копировании материала укажите ссылку © 2016
контакты
d.120-bal.ru
..На главную