Экспрессия антимикробных пептидов у больных акне, получающих лечение системным изотретиноином






Скачать 272.34 Kb.
НазваниеЭкспрессия антимикробных пептидов у больных акне, получающих лечение системным изотретиноином
страница1/3
Дата публикации07.03.2015
Размер272.34 Kb.
ТипАвтореферат
d.120-bal.ru > Документы > Автореферат
  1   2   3
На правах рукописи


Боровая Алёна Сергеевна

Экспрессия антимикробных пептидов у больных акне, получающих лечение системным изотретиноином
14.01.10 ‒ кожные и венерические болезни


АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва 2013
Работа выполнена в ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Министерства здравоохране­ния России
Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Олисова Ольга Юрьевна
Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры кожных и венерических болезней с курсом косметологии Медицинского института усовершенство­вания врачей ФГБОУ ВПО Московский Государственный Университет Пищевых Производств

Масюкова Светлана Андреевна
доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры кожных и венерических болезней факультета послевузовского профессионального образования врачей Первый МГМУ имени И.М. Сеченова

Снарская Елена Сергеевна
Ведущая организация: ФГБОУ ВПО Российский университет Дружбы Народов (РУДН).
Защита диссертации состоится «_____» ______»20___г. в «____» часов на заседании Диссертационного совета Д 208.040.10 при ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова по адресу: 119991, г. Москва, ул. М. Трубецкая, д.8, стр. 2.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, д. 49

Автореферат разослан «____» _________20___г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Эрдес Светлана Ильинична

Актуальность исследования. Акне (угревая болезнь, вульгарные угри) – распространенное заболевание кожи, поражающее до 85% лиц в возрасте от 12 до 25 лет. Встречаемость тяжелых и средне-тяжелых форм составляет, по данным разных авторов, 20%-35% от общей заболеваемости акне [Amado J.M. et al., 2006; Nijsten T. et al., 2007; Nast A. et al., 2012]. Согласно официальной статистике в Российской Федерации акне диагностируется у 88% обследованного населения в возрасте от 16-25 лет [Кубанова А.А. с соавт., 2003].

Лечение акне на сегодняшний день представляет актуальную социальную задачу в связи с поражением лица, формированием поствоспалительных явлений (дисхромии, рубцовые изменения), отсутствием эффекта от ранее проводимой терапии, что часто сопровождается выраженной психосоциальной дезадаптацией больных даже при нетяжелых формах дерматоза [Ара­­­­вий­ская Е.Р., 2003; Белоусова Т.А. с соавт., 2006; Львов А.Н. с соавт., 2008; Оли­­­­сова О.Ю с соавт., 2011]. Данный факт определяет актуальность исследования патогенети­ческих аспектов акне для понимания причин развития тяжелых форм заболевания и дальнейшей разработки эффективных методов лечения.

Хотя акне было и остается предметом интенсивных наблюдений, его этиопатогенез не до конца изучен. Известно, что P. acnes играют важную роль в патогенезе акне. Несмотря на принадлежность данных бактерий к резидентам нормальной микрофлоры кожи, P. acnes продуцируют большое количество медиаторов воспаления, которые в свою очередь влияют на экспрессию антимикробных пептидов (АМП), участвующих в формировании воспаления [Greenman J. et al., 1983; Kurokawa I. et al., 2009; Vowels B.R. et al., 1999]. Список известных на сегодняшний день пептидов с антимикробной активностью, найденных в коже, насчитывает более 20. Было доказано, что данные пептиды играют роль в хемотаксисе лимфоцитов и участвуют в регуляции роста клеток и заживлении ран [Wiesner J. et al., 2010].

На сегодняшний день представляется очевидным, что АМП формируют «химический щит» на поверхности кожи, а также участвуют в координации многочисленных компонентов врожденной и адаптивной иммунной системы [Braff M.H. et al., 2005; Schauber J. et al., 2007]. Тем не менее, представлены только немногочисленные исследования зарубежных авторов и единичные работы отечественных дерматологов, изучающие роль АМП при акне [Philpott M.P., 2003; Ganceviciene R. et al., 2009; Schlapbach C. et al., 2009; Ganceviciene R. et al., 2006; Chronnell C.V.T. et al., 2001; Махмудов А. В. с соавт., 2012].

Некоторые из них демонстрируют, что пациенты с угревой болезнью имеют нарушения регуляции продукции АМП [Philpott M.P., 2003]. В других работах можно наблюдать увеличение уровня АМП в воспалительных участках кожи, что указывает на возможную роль некоторых пептидов в защите от инфекции [Ganceviciene R. et al., 2009; Schlapbach C. et al., 2009; Ganceviciene R. et al., 2006; Chronnell C.V.T. et al., 2001]. Однако исследования, посвященные более детальному качественному и количественному анализу большинства АМП, участвующих в акне, не проводились.

В лечении угревой болезни в последние годы удалось достичь больших успехов. Системный изотретиноин признан единственным препаратом, приводящим к длительной ремиссии заболевания у 70-80% больных [Ho V. et al., 1995; Cunliffe W. J., 1993]. Более 20 лет он остается самым эффективным медикаментозным средством терапии средних и тяжелых форм акне, поскольку оказывает влияние на основные этиопатогенетические факторы дерматоза. Ограничением его применения для лечения пациентов с более легкими формами заболевания являются многочисленные побочные эффекты, которые в основном являются (кроме тератогенного эффекта) дозозависимыми [Cunliffe W.J. et al., 1994]. В связи с этим представляется актуальной оптимизация терапии акне легкой и средней степени тяжести, направленная на снижение ежедневной и курсовой дозы системного изотретиноина с целью повышения переносимости лечения при сохранении его эффективности. В тоже время представляет научный и клинический интерес исследование АМП, присутствующих в элементах акне в сравнении с непораженной кожей. При этом влияние терапии изотретиноином на экспрессию основных типов АМП в коже больных акне до настоящего времени не проводилось, что также послужило основанием для проведения данного исследования.
Целью настоящего исследования явилось изучение патогенетической роли 14 типов АМП в коже больных акне в процессе лечения системным изотретиноином. В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:
1. Оценить уровень относительной экспрессии АМП в коже больных акне методом количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени.

2. Изучить корреляцию относительной экспрессии исследуемых АМП с изме­нением клинической картины в процессе лечения.

3. Оценить клиническую эффективность различных схем изотретиноина у больных акне в зависимости от степени тяжести заболевания.

4. Установить частоту встречаемости побочных эффектов в зависимости от дозы изотретиноина.
Научная новизна исследования.

Впервые изучена относительная экспрессия наиболее важных АМП (кателицидина, β-дефензина-2, лактоферрина, α-дефензина, гранулизина, перфорина, RANTES, лизоцима, дермцидина, РНК-азы-7, псориазина, CXCL9, хромогранина В, субстанции Р) в динамике лечения системным изотретиноином. У больных акне выявлено увеличение относительной экспрессии кателицидина, β-дефензина-2, лактоферрина, лизоцима, псориазина, РНК-азы-7, подавление относительной экспрессии α-дефензина.

Нами установлено, что такие антимикробные пептиды как кателицидин, β-дефензин-2, лактоферрин, лизоцим, РНК-аза-7, псориазин и α-дефензин принимают активное участие в патогенезе акне, в тоже время остальные АМП не играют роли в развитии заболевания.

Впервые изучено влияние стандартных схем терапии изотретиноином на показатель относительной экспрессии исследуемых АМП у пациентов с тяжелым течением акне, которое заключается в нормализации относительной экспрессии АМП в виде увеличения α-дефензина, подавления кателицидина, β-дефензина-2, тенденции к снижению лактоферрина, псориазина, лизоцима. При этом отмечается отсутствие статистически значимых изменений относительной экспрессии в случае РНК-азы-7, гранулизина, перфорина, RANTES, дермцидина, CXCL9, хромогранина В, субстанции Р.
Практическая значимость:

1. Определен спектр наиболее важных АМП, которые могут быть использованы для оценки динамики заболевания и эффективности проводимой терапии.

2. Созданы предпосылки дальнейших экспериментов с участием иссле­дованных нами АМП с целью поиска новых терапевтических стратегий в терапии вульгарных угрей.

3. Патогенетически обоснована, подтверждена и внедрена в практику терапия акне легкой и средней степени тяжести низкими дозами изотретиноина (<0,5 мг/кг/день), позволяющая повысить эффективность и переносимость лечения акне легкой и средней степени тяжести, а также акне, резистентных к стандартной терапии; добиться отсутствия значимых побочных эффектов, характерных для терапии системными ретиноидами и снизить количество рецидивов.

4. При сравнительном анализе частоты встречаемости побочных эффектов при лечении стандартными и низкими дозами изотретиноина подтверждено отсутствие значимых побочных эффектов при терапии низкими дозами.

Основные положения, выносимые на защиту:

  1. В патогенезе акне значительная роль принадлежит АМП, проявляющаяся в увеличении относительной экспрессии кателицидина, β-дефензина-2, лактоферрина, лизоцима, псориазина, РНК-азы-7, подавлении относительной экспрессии α-дефензина.

  2. Положительная динамика в процессе терапии акне коррелирует с нормализацией относительной экспрессии исследуемых АМП, а именно, в увеличении α-дефензина, подавлении относительной экспрессии кателицидина, β-дефензина-2, тенденции к снижению лактоферрина, псориазина, лизоцима.

  3. Для лечения больных акне легкой и средней степени тяжести оптимальными дозами системного изотретиноина являются низкие дозы препарата (<0,5 мг/кг/день), для тяжелой степени акне - стандартные дозы изотретиноина (0,5-1 мг/кг/день) при достижении кумулятивной дозы 128,4 мг/кг.

  4. При сравнительном анализе частоты встречаемости побочных эффектов при лечении стандартными и низкими дозами изотретиноина отсутствуют значимые побочные эффекты при терапии низкими дозами.


Апробация работы.

Материалы диссертации изложены на научно-практической конференции с международным участием XXIX «Рахмановские чтения», г. Москва, 2012 г., научно-клинической конференции кафедры кожных и венерических болезней им. В.А. Рахманова лечебного факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова, г. Москва, 2012г.

Апробация диссертационной работы состоялась на научно-практической конференции кафедры кожных и венерических болезней имени В.А. Рахманова лечебного факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова 16 октября 2012 года.

Личный вклад автора.

Автором проведено углубленное клинико-анамнестическое обследование больных разной степени тяжести акне, выполнен весь объем инструментальных исследований, организовано ведение пациентов по индивидуально разработанному плану, сформирована база данных. Интерпретированы данные лабораторных исследований, проведена статистическая обработка и анализ полученных результатов, сформулированы выводы и даны практические рекомендации.
Внедрение результатов исследования.

Результаты работы внедрены в научно-практическую деятельность кафедры и клиники кожных и венерических болезней им. В.А. Рахманова лечебного факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова.
Публикации.

Результаты диссертационной работы отражены в 5 печатных работах, 3 из них опубликованы в научных журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.
Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 162 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, клинической характеристики больных, главы результатов собственных наблюдений, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Работа иллюстрирована 11 таблицами, 74 рисунками, 4 фотографиями. Список литературы включает 177 источников, в том числе 64 отечественных и 113 зарубежных авторов.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследования

Материалом исследования служили данные динамического клинико-лабораторного обследования 60 больных акне, получавших лечение в клинике кожных и венерических болезней им. В.А. Рахманова Первый МГМУ им. И.М. Сеченова. Лабораторную часть работы проводили в лаборатории молекулярной биологии Клиники Аллергологии и Дерматологии университета Людвига-Максимильяна города Мюнхена (Германия).

В исследование были включены дееспособные больные (мужчины и женщины) с установленным диагнозом акне легкой, средней, тяжелой степени тяжести в возрасте от 18 лет, не получавшие в течение 2-х недель до начала терапии системным изотретиноином (препаратом Роаккутан) любых системных или топических методов лечения. В исследование не были включены пациенты с любыми соматическими заболеваниями в стадии обострения, наличием психических расстройств, беременностью (имеющаяся или планируемая в течение ближайшего года).

Всем пациентам проводилось обследование по единой программе, которая включала углубленное изучение анамнестических данных, жалоб, клинического течения заболевания, дерматологического статуса, дерматологического индекса качества жизни (ДИКЖ), клинико-лабораторное обследование.

В качестве дерматологической оценки степени тяжести акне была взята классификация, предложенная Американской академией дерматологии в модификации М.А. Самгина и С.А. Монахова [Самгин М.А. с соавт., 2005]. Критерием степени тяжести служил преобладающий тип элементов и их количество:

I степень - комедоны (открытые и закрытые) и до 10 папул;

II степень - комедоны, папулы и до 5 пустул;

III степень - комедоны, папуло-пустулезная сыпь, до 5 узлов;

IV степень - выраженная воспалительная реакция в глубоких слоях дермы, с формированием множественных, болезненных узлов и кист.

Методы исследования включали:

1.Лабораторные методы:

а) гематологическое исследование крови (общий анализ крови) до лечения и каждый месяц в процессе лечения;

б) биохимическое исследование крови (креатинин, общий билирубин, холестерин, АСТ, АЛТ, γ-ГТ, липидный профиль) проводили до лечения и каждый месяц в процессе лечения;

в) тест на беременность (для лиц женского пола) проводили до лечения, далее пациенты подписывали информированное согласие о побочных эффектах препарата.

2. Молекулярно-биологическое исследование:
Количественная ПЦР в реальном времени (q-RT PCR) с целью выявления относительной экспрессии АМП: кателицидина, β-дефензина-2, α-дефензина, лизоцима, псориазина, лактоферрина, RANTES (CCL5), субстанции Р, CXCL9, хромогранина В, гранулизина, дермцидина, РНК-азы-7, перфорина.

Объектом исследования служил биопсийный материал воспалительных элементов кожи больных тяжелой степенью акне, взятый методом «бритвенной» биопсии до лечения Роаккутаном, через 2 и 6 месяцев лечения. Данная группа пациентов получала первые 2 месяца стандартную фиксированную дозу препарата, равную 0,5 мг/кг в сутки. Выбранная нами доза изотретиноина через 2 месяца лечения предположительно должна была иметь более видимую динамику изменений экспрессии АМП по сравнению с низкими дозами. Для сравнения были взяты пробы кожи здоровых добровольцев, составляющих группу контроля.

Наше исследование имело цель определить наличие и количество мРНК определенного спектра АМП, что позволило получить количественную информацию о содержании данной мРНК в клетках и, соответственно, судить об уровне экспрессии исследуемых генов в коже.

Исследование включало 3 этапа:

1. Изоляция общей РНК клетки

2. Синтез к-ДНК в результате реакции обратной транскрипции

3. Непосредственно реакция q-RT PCR
Для осуществления метода были использованы следующие материалы:

1. Пробы кожи, взятые методом «бритвенной биопсии» с папулезных элементов области спины 13 больных акне до лечения, 11 больных через 2 месяца терапии и 6 больных после завершения лечения;

2. 11 проб кожи здоровых добровольцев;

3. Раствор-стабилизатор РНК (RNAlater RNA Stabilization Reagent (Qiagen) #76106);

4. Специфические олигонуклеотидные зонды TaqMan для регистрации флюоресценции;

5. Праймеры;

6. PBGD specific Probe Set Roche #05046149001;

7. Наборы:

- Precellys tissue RNA kit (Peqlab) #12-7621-00;

- iScript cDNA Synthese Kit (Biorad) #170-8890;

- Kombipack Light Cycler Set Roche #04957202702.

8. Амплификатор Light Cycler (Германия).
  1   2   3

Добавить документ в свой блог или на сайт

Похожие:

Экспрессия антимикробных пептидов у больных акне, получающих лечение системным изотретиноином iconМолекулярно клеточные основы реализации биологической активности...

Экспрессия антимикробных пептидов у больных акне, получающих лечение системным изотретиноином iconДинамика показателей качества жизни у больных акне на фоне терапии изотретиноином
Работа выполнена в фгу «Центральный научно-исследовательский кожно-венерологический институт» Федерального агентства здравоохранения...

Экспрессия антимикробных пептидов у больных акне, получающих лечение системным изотретиноином iconТемы выпускных квалификационных работ по эндокринологии
Влияние аторвастатина на показатели липидного спектра и толщину комплекса интима-медиа у пациентов с сахарным диабетом 2 типа в двух...

Экспрессия антимикробных пептидов у больных акне, получающих лечение системным изотретиноином iconMoevenpick dead sea resort
Лечение кожных заболеваний (Псориаза, Витилиго, Акне & Нейродермитов) пакет включает

Экспрессия антимикробных пептидов у больных акне, получающих лечение системным изотретиноином iconРекомендации по лечению и профилактике кожных заболеваний Акне
Раннее начало лечения акне крайне важно для пациента, так как это помогает уменьшить вероятность таких осложнений как рубцы

Экспрессия антимикробных пептидов у больных акне, получающих лечение системным изотретиноином iconВыбор лечебной тактики у больных различными формами акне
Работа выполнена в Государственном институте усовершенствования врачей Министерства обороны Российской Федерации

Экспрессия антимикробных пептидов у больных акне, получающих лечение системным изотретиноином iconЛечение больных с гнойно-воспалительными процессами в челюстно-лицевой...
Лечение больных основано на комплексном проведении оперативных вмешательств и консервативных мероприятий. Терапевтический комплекс...

Экспрессия антимикробных пептидов у больных акне, получающих лечение системным изотретиноином iconНазвание школы
Проведена оценка роли регуляторных пептидов в процессе поддержания структурного гомеостаза

Экспрессия антимикробных пептидов у больных акне, получающих лечение системным изотретиноином icon«Дифференцированное лечение женщин с акне при различных формах гиперандрогении»
Гоу впо московского Государственного Медико-стоматологического Университета Федерального агентства по здравоохранению и социальному...

Экспрессия антимикробных пептидов у больных акне, получающих лечение системным изотретиноином iconОсобенности люминол- и люцигенин-зависимой хемилюминесценции нейтрофильных...
Населения планеты, характеризующееся хроническим воспалением синовиальной оболочки суставов, прогрессирующей деструкцией хрящевой...

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:


медицина


При копировании материала укажите ссылку © 2016
контакты
d.120-bal.ru
..На главную