Экспрессия антимикробных пептидов у больных акне, получающих лечение системным изотретиноином
Скачать 272.34 Kb.
|
| На правах рукописи Боровая Алёна Сергеевна Экспрессия антимикробных пептидов у больных акне, получающих лечение системным изотретиноином 14.01.10 ‒ кожные и венерические болезни АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва 2013 Работа выполнена в ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Министерства здравоохранения России Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Олисова Ольга Юрьевна Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры кожных и венерических болезней с курсом косметологии Медицинского института усовершенствования врачей ФГБОУ ВПО Московский Государственный Университет Пищевых Производств Масюкова Светлана Андреевна доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры кожных и венерических болезней факультета послевузовского профессионального образования врачей Первый МГМУ имени И.М. Сеченова Снарская Елена Сергеевна Ведущая организация: ФГБОУ ВПО Российский университет Дружбы Народов (РУДН). Защита диссертации состоится «_____» ______»20___г. в «____» часов на заседании Диссертационного совета Д 208.040.10 при ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова по адресу: 119991, г. Москва, ул. М. Трубецкая, д.8, стр. 2. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, д. 49 Автореферат разослан «____» _________20___г. Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор Эрдес Светлана Ильинична Актуальность исследования. Акне (угревая болезнь, вульгарные угри) – распространенное заболевание кожи, поражающее до 85% лиц в возрасте от 12 до 25 лет. Встречаемость тяжелых и средне-тяжелых форм составляет, по данным разных авторов, 20%-35% от общей заболеваемости акне [Amado J.M. et al., 2006; Nijsten T. et al., 2007; Nast A. et al., 2012]. Согласно официальной статистике в Российской Федерации акне диагностируется у 88% обследованного населения в возрасте от 16-25 лет [Кубанова А.А. с соавт., 2003]. Лечение акне на сегодняшний день представляет актуальную социальную задачу в связи с поражением лица, формированием поствоспалительных явлений (дисхромии, рубцовые изменения), отсутствием эффекта от ранее проводимой терапии, что часто сопровождается выраженной психосоциальной дезадаптацией больных даже при нетяжелых формах дерматоза [Аравийская Е.Р., 2003; Белоусова Т.А. с соавт., 2006; Львов А.Н. с соавт., 2008; Олисова О.Ю с соавт., 2011]. Данный факт определяет актуальность исследования патогенетических аспектов акне для понимания причин развития тяжелых форм заболевания и дальнейшей разработки эффективных методов лечения. Хотя акне было и остается предметом интенсивных наблюдений, его этиопатогенез не до конца изучен. Известно, что P. acnes играют важную роль в патогенезе акне. Несмотря на принадлежность данных бактерий к резидентам нормальной микрофлоры кожи, P. acnes продуцируют большое количество медиаторов воспаления, которые в свою очередь влияют на экспрессию антимикробных пептидов (АМП), участвующих в формировании воспаления [Greenman J. et al., 1983; Kurokawa I. et al., 2009; Vowels B.R. et al., 1999]. Список известных на сегодняшний день пептидов с антимикробной активностью, найденных в коже, насчитывает более 20. Было доказано, что данные пептиды играют роль в хемотаксисе лимфоцитов и участвуют в регуляции роста клеток и заживлении ран [Wiesner J. et al., 2010]. На сегодняшний день представляется очевидным, что АМП формируют «химический щит» на поверхности кожи, а также участвуют в координации многочисленных компонентов врожденной и адаптивной иммунной системы [Braff M.H. et al., 2005; Schauber J. et al., 2007]. Тем не менее, представлены только немногочисленные исследования зарубежных авторов и единичные работы отечественных дерматологов, изучающие роль АМП при акне [Philpott M.P., 2003; Ganceviciene R. et al., 2009; Schlapbach C. et al., 2009; Ganceviciene R. et al., 2006; Chronnell C.V.T. et al., 2001; Махмудов А. В. с соавт., 2012]. Некоторые из них демонстрируют, что пациенты с угревой болезнью имеют нарушения регуляции продукции АМП [Philpott M.P., 2003]. В других работах можно наблюдать увеличение уровня АМП в воспалительных участках кожи, что указывает на возможную роль некоторых пептидов в защите от инфекции [Ganceviciene R. et al., 2009; Schlapbach C. et al., 2009; Ganceviciene R. et al., 2006; Chronnell C.V.T. et al., 2001]. Однако исследования, посвященные более детальному качественному и количественному анализу большинства АМП, участвующих в акне, не проводились. В лечении угревой болезни в последние годы удалось достичь больших успехов. Системный изотретиноин признан единственным препаратом, приводящим к длительной ремиссии заболевания у 70-80% больных [Ho V. et al., 1995; Cunliffe W. J., 1993]. Более 20 лет он остается самым эффективным медикаментозным средством терапии средних и тяжелых форм акне, поскольку оказывает влияние на основные этиопатогенетические факторы дерматоза. Ограничением его применения для лечения пациентов с более легкими формами заболевания являются многочисленные побочные эффекты, которые в основном являются (кроме тератогенного эффекта) дозозависимыми [Cunliffe W.J. et al., 1994]. В связи с этим представляется актуальной оптимизация терапии акне легкой и средней степени тяжести, направленная на снижение ежедневной и курсовой дозы системного изотретиноина с целью повышения переносимости лечения при сохранении его эффективности. В тоже время представляет научный и клинический интерес исследование АМП, присутствующих в элементах акне в сравнении с непораженной кожей. При этом влияние терапии изотретиноином на экспрессию основных типов АМП в коже больных акне до настоящего времени не проводилось, что также послужило основанием для проведения данного исследования. Целью настоящего исследования явилось изучение патогенетической роли 14 типов АМП в коже больных акне в процессе лечения системным изотретиноином. В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи: 1. Оценить уровень относительной экспрессии АМП в коже больных акне методом количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени. 2. Изучить корреляцию относительной экспрессии исследуемых АМП с изменением клинической картины в процессе лечения. 3. Оценить клиническую эффективность различных схем изотретиноина у больных акне в зависимости от степени тяжести заболевания. 4. Установить частоту встречаемости побочных эффектов в зависимости от дозы изотретиноина. Научная новизна исследования. Впервые изучена относительная экспрессия наиболее важных АМП (кателицидина, β-дефензина-2, лактоферрина, α-дефензина, гранулизина, перфорина, RANTES, лизоцима, дермцидина, РНК-азы-7, псориазина, CXCL9, хромогранина В, субстанции Р) в динамике лечения системным изотретиноином. У больных акне выявлено увеличение относительной экспрессии кателицидина, β-дефензина-2, лактоферрина, лизоцима, псориазина, РНК-азы-7, подавление относительной экспрессии α-дефензина. Нами установлено, что такие антимикробные пептиды как кателицидин, β-дефензин-2, лактоферрин, лизоцим, РНК-аза-7, псориазин и α-дефензин принимают активное участие в патогенезе акне, в тоже время остальные АМП не играют роли в развитии заболевания. Впервые изучено влияние стандартных схем терапии изотретиноином на показатель относительной экспрессии исследуемых АМП у пациентов с тяжелым течением акне, которое заключается в нормализации относительной экспрессии АМП в виде увеличения α-дефензина, подавления кателицидина, β-дефензина-2, тенденции к снижению лактоферрина, псориазина, лизоцима. При этом отмечается отсутствие статистически значимых изменений относительной экспрессии в случае РНК-азы-7, гранулизина, перфорина, RANTES, дермцидина, CXCL9, хромогранина В, субстанции Р. Практическая значимость: 1. Определен спектр наиболее важных АМП, которые могут быть использованы для оценки динамики заболевания и эффективности проводимой терапии. 2. Созданы предпосылки дальнейших экспериментов с участием исследованных нами АМП с целью поиска новых терапевтических стратегий в терапии вульгарных угрей. 3. Патогенетически обоснована, подтверждена и внедрена в практику терапия акне легкой и средней степени тяжести низкими дозами изотретиноина (<0,5 мг/кг/день), позволяющая повысить эффективность и переносимость лечения акне легкой и средней степени тяжести, а также акне, резистентных к стандартной терапии; добиться отсутствия значимых побочных эффектов, характерных для терапии системными ретиноидами и снизить количество рецидивов. 4. При сравнительном анализе частоты встречаемости побочных эффектов при лечении стандартными и низкими дозами изотретиноина подтверждено отсутствие значимых побочных эффектов при терапии низкими дозами. Основные положения, выносимые на защиту:
Апробация работы. Материалы диссертации изложены на научно-практической конференции с международным участием XXIX «Рахмановские чтения», г. Москва, 2012 г., научно-клинической конференции кафедры кожных и венерических болезней им. В.А. Рахманова лечебного факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова, г. Москва, 2012г. Апробация диссертационной работы состоялась на научно-практической конференции кафедры кожных и венерических болезней имени В.А. Рахманова лечебного факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова 16 октября 2012 года. Личный вклад автора. Автором проведено углубленное клинико-анамнестическое обследование больных разной степени тяжести акне, выполнен весь объем инструментальных исследований, организовано ведение пациентов по индивидуально разработанному плану, сформирована база данных. Интерпретированы данные лабораторных исследований, проведена статистическая обработка и анализ полученных результатов, сформулированы выводы и даны практические рекомендации. Внедрение результатов исследования. Результаты работы внедрены в научно-практическую деятельность кафедры и клиники кожных и венерических болезней им. В.А. Рахманова лечебного факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова. Публикации. Результаты диссертационной работы отражены в 5 печатных работах, 3 из них опубликованы в научных журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 162 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, клинической характеристики больных, главы результатов собственных наблюдений, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Работа иллюстрирована 11 таблицами, 74 рисунками, 4 фотографиями. Список литературы включает 177 источников, в том числе 64 отечественных и 113 зарубежных авторов. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования Материалом исследования служили данные динамического клинико-лабораторного обследования 60 больных акне, получавших лечение в клинике кожных и венерических болезней им. В.А. Рахманова Первый МГМУ им. И.М. Сеченова. Лабораторную часть работы проводили в лаборатории молекулярной биологии Клиники Аллергологии и Дерматологии университета Людвига-Максимильяна города Мюнхена (Германия). В исследование были включены дееспособные больные (мужчины и женщины) с установленным диагнозом акне легкой, средней, тяжелой степени тяжести в возрасте от 18 лет, не получавшие в течение 2-х недель до начала терапии системным изотретиноином (препаратом Роаккутан) любых системных или топических методов лечения. В исследование не были включены пациенты с любыми соматическими заболеваниями в стадии обострения, наличием психических расстройств, беременностью (имеющаяся или планируемая в течение ближайшего года). Всем пациентам проводилось обследование по единой программе, которая включала углубленное изучение анамнестических данных, жалоб, клинического течения заболевания, дерматологического статуса, дерматологического индекса качества жизни (ДИКЖ), клинико-лабораторное обследование. В качестве дерматологической оценки степени тяжести акне была взята классификация, предложенная Американской академией дерматологии в модификации М.А. Самгина и С.А. Монахова [Самгин М.А. с соавт., 2005]. Критерием степени тяжести служил преобладающий тип элементов и их количество: I степень - комедоны (открытые и закрытые) и до 10 папул; II степень - комедоны, папулы и до 5 пустул; III степень - комедоны, папуло-пустулезная сыпь, до 5 узлов; IV степень - выраженная воспалительная реакция в глубоких слоях дермы, с формированием множественных, болезненных узлов и кист. Методы исследования включали: 1.Лабораторные методы: а) гематологическое исследование крови (общий анализ крови) до лечения и каждый месяц в процессе лечения; б) биохимическое исследование крови (креатинин, общий билирубин, холестерин, АСТ, АЛТ, γ-ГТ, липидный профиль) проводили до лечения и каждый месяц в процессе лечения; в) тест на беременность (для лиц женского пола) проводили до лечения, далее пациенты подписывали информированное согласие о побочных эффектах препарата. 2. Молекулярно-биологическое исследование: Количественная ПЦР в реальном времени (q-RT PCR) с целью выявления относительной экспрессии АМП: кателицидина, β-дефензина-2, α-дефензина, лизоцима, псориазина, лактоферрина, RANTES (CCL5), субстанции Р, CXCL9, хромогранина В, гранулизина, дермцидина, РНК-азы-7, перфорина. Объектом исследования служил биопсийный материал воспалительных элементов кожи больных тяжелой степенью акне, взятый методом «бритвенной» биопсии до лечения Роаккутаном, через 2 и 6 месяцев лечения. Данная группа пациентов получала первые 2 месяца стандартную фиксированную дозу препарата, равную 0,5 мг/кг в сутки. Выбранная нами доза изотретиноина через 2 месяца лечения предположительно должна была иметь более видимую динамику изменений экспрессии АМП по сравнению с низкими дозами. Для сравнения были взяты пробы кожи здоровых добровольцев, составляющих группу контроля. Наше исследование имело цель определить наличие и количество мРНК определенного спектра АМП, что позволило получить количественную информацию о содержании данной мРНК в клетках и, соответственно, судить об уровне экспрессии исследуемых генов в коже. Исследование включало 3 этапа: 1. Изоляция общей РНК клетки 2. Синтез к-ДНК в результате реакции обратной транскрипции 3. Непосредственно реакция q-RT PCR Для осуществления метода были использованы следующие материалы: 1. Пробы кожи, взятые методом «бритвенной биопсии» с папулезных элементов области спины 13 больных акне до лечения, 11 больных через 2 месяца терапии и 6 больных после завершения лечения; 2. 11 проб кожи здоровых добровольцев; 3. Раствор-стабилизатор РНК (RNAlater RNA Stabilization Reagent (Qiagen) #76106); 4. Специфические олигонуклеотидные зонды TaqMan для регистрации флюоресценции; 5. Праймеры; 6. PBGD specific Probe Set Roche #05046149001; 7. Наборы: - Precellys tissue RNA kit (Peqlab) #12-7621-00; - iScript cDNA Synthese Kit (Biorad) #170-8890; - Kombipack Light Cycler Set Roche #04957202702. 8. Амплификатор Light Cycler (Германия). |
Добавить документ в свой блог или на сайт
Похожие:
 | | Работа выполнена в фгу «Центральный научно-исследовательский кожно-венерологический институт» Федерального агентства здравоохранения... | |
 | Влияние аторвастатина на показатели липидного спектра и толщину комплекса интима-медиа у пациентов с сахарным диабетом 2 типа в двух... | | Лечение кожных заболеваний (Псориаза, Витилиго, Акне & Нейродермитов) пакет включает |
| Раннее начало лечения акне крайне важно для пациента, так как это помогает уменьшить вероятность таких осложнений как рубцы | | Работа выполнена в Государственном институте усовершенствования врачей Министерства обороны Российской Федерации |
| Лечение больных основано на комплексном проведении оперативных вмешательств и консервативных мероприятий. Терапевтический комплекс... | | Проведена оценка роли регуляторных пептидов в процессе поддержания структурного гомеостаза |
| Гоу впо московского Государственного Медико-стоматологического Университета Федерального агентства по здравоохранению и социальному... | | Населения планеты, характеризующееся хроническим воспалением синовиальной оболочки суставов, прогрессирующей деструкцией хрящевой... |