Инструкция по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека кинетическим методом «а-амилаза uts»
Скачать 94.88 Kb.
|
| ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека кинетическим методом «а-АМИЛАЗА - UTS» Набор «а-АМИЛАЗА –UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ. Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05459 Информация для заказа набора «а-АМИЛАЗА –UTS»
где v – объем фотометрической ячейки анализатора. 1. НАЗНАЧЕНИЕ1.1. Набор реагентов «а-АМИЛАЗА -UTS» предназначен для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов. 1.2. Альфа-амилаза относится к группе гидролаз, катализирующих гидролиз полисахаридов (крахмала, гликогена) до моно- и дисахаридов (мальтоза, глюкоза). Наиболее богаты амилазой поджелудочная железа и слюнные железы (Р-тип и S-тип), соответственно. Альфа-амилаза попадает в кровь вследствие цитолиза клеток, содержащих этот фермент, с мочой секретируется Р-тип амилазы [1,2,3]. На этом основано клиническое значение анализа. 1.3. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа, что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13.0001-2003. 2. ПРИНЦИП МЕТОДА2.1. Альфа-амилаза катализирует реакцию гидролиза субстрата 2-хлор-4-нитрофенил-α-D-мальтотриозида (CNPG3) с образованием следующих соединений: 2-хлор-4-нитрофенола (CNP), 2-хлор-4-нитрофенил-α-D-мальтозида (CNPG2), мальтотриозы (М3) и глюкозы (G) по следующей схеме реакции: 10CNPG3 Амилаза 9CNP + CNPG2 + М3 + G  Скорость образования 2-хлор-4-нитрофенола (CNP) пропорциональна активности фермента и определяется фотометрическим методом при длине волны 405 нм [4]. 2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны 405 нм молекулами 2-хлор-4-нитрофенола. Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски 2-хлор-4-нитрофенола и, следовательно, прямо пропорционально активности альфа-амилазы в анализируемом образце. 3. СОСТАВ НАБОРА3.1. Набор реагентов поставляется в виде готового раствора реагента. Реагент и его состав:
4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ4.1. Набор обеспечивает линейную область определения активности альфа-амилазы от 4,0 МЕ/л до 1600 МЕ/л, отклонение от линейности во всем указанном диапазоне не превышает 5%. 4.2. Чувствительность – не более 4 МЕ/л. 4.3. Воспроизводимость - коэффициент вариации результатов определений – не более 5%. 4.4. Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам, аттестованным данным методом (CNPG3). 4.5. Для калибровки автоматизированных фотометрических систем рекомендуется использовать сывороточные калибраторы, аттестованные по значению активности альфа-амилазы данным методом (CNPG3). 4.6. Нормальные величины активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме взрослого человека составляют: 23-100 МЕ/л; в моче 10-490 МЕ/л [3]. 4.7. Перечень лекарственных препаратов, влияющих на определение активности альфа-амилазы, приведены в обзоре [4]. 5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ5.1. Реагент содержит 2-хлор-4-нитрофенил-α-D-мальтотриозид и тиоцианат натрия. Следует избегать попадания реагента на кожу и слизистые. В случае попадания их на кожу и слизистые оболочки необходимо промыть поражённые участки большим количеством проточной воды. 5.2. При выполнении лабораторного исследования необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.). 5.3. При работе с биологическими пробами следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции. 6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ6.1. Для выполнения анализа по определению активности альфа-амилазы с применением набора реагентов «альфа-АМИЛАЗА-UTS» рекомендуется использовать полуавтоматический или автоматический биохимический анализатор, позволяющий выполнять измерение скорости изменения оптической плотности при длине волны 405 нм (кинетический режим) и обеспечивающий термостатирование фотометрической ячейки при температуре +(37±0,5) ОС. 6.2. Общелабораторное оборудование. 7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ7.1. Негемолизированная сыворотка или плазма крови. 7.2. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов крови немедленно после взятия крови. 7.3. Образцы сыворотки или плазмы стабильны 7 суток при комнатной температуре, 1 месяц при +(2-8) ОС, образцы не замораживать [3]. 7.4. Образцы мочи стабильны не более 24 часов при +(2-8) ОС, не замораживать [3]. Проверьте уровень pH. Моча с pH < 5 может приводить к снижению стабильности фермента. 8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА8.1. Реагент готов к использованию. 8.2. Реагент перед применением необходимо прогреть до температуры +(37±0,5) ОС. 8.3. Оптическая плотность реагента при 405 нм должна составлять не более 0,2 ед. опт. плотн. (Б), (при использовании кювет с длиной оптического пути 10 мм). 8.4. Для проведения анализа на полуавтоматическом анализаторе должен быть выбран кинетический режим измерения с калибровкой по фактору и установлены следующие значения параметров методики:
* значение F приведено для случая, когда в анализаторе используются кюветы или пробирки с оптическим путем L0=10мм. При использовании кювет или пробирок с иным оптическим путем (L1) следует приведенное значение изменить и установить следующее значение фактора: F1=FохL0/L1
8.5. Отобрать компоненты реакционной смеси с использованием пипеточных дозаторов в объемах, указанных в таблице:
8.5.1. При использовании биохимических анализаторов с другим фотометрическим объемом количество реагента и анализируемых образцов в зависимости от объема используемой кюветы может быть пропорционально изменено (соотношение пробы к реагенту составляет 1:50) 8.5.2. Пробы перемешать, поместить в фотометрическую ячейку анализатора. На стадии лаг-фазы в течение 1 минуты скорость изменения концентрации альфа-амилазы выходит на линейный режим. Далее измерения оптической плотности провести не менее 3 раз (в течение 1-3 мин) через равные промежутки времени. 8.5.3. Результат анализа - активность альфа-амилазы - рассчитывается автоматически при введении в память полуавтоматического биохимического анализатора фактора, указанного в таблице. 8.5.4. Если результат определения активности альфа-амилазы превышает 1600 МЕ/л, то следует разбавить пробу физраствором (0,9% NaCl) в 2 раза и повторно провести измерение, а полученный результат умножить на 2. 8.6. Для выполнения измерения на автоматическом биохимическом анализаторе следует: 8.6.1. Установить программу определения активности альфа-амилазы согласно таблице:
* - Перед первым использованием набора необходимо определить значение фактора по мультикалибратору, аттестованному по активности альфа-амилазы методом с использованием CNPG3, полученное значение ввести в память анализатора. 8.6.2. Если результат измерения активности альфа-амилазы выше 1600 МЕ/л, следует разбавить пробу физраствором (0,9% NaCl) в 2 раз, повторно провести измерение, полученный результат умножить на 2. 9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА9.1. Набор реагентов «а-АМИЛАЗА-UTS» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2-8 ОС в течение всего срока годности. Допускается хранение набора до 25 ОС не более 10 суток. Замораживание реагента не допускается. 9.2. Срок годности набора 18 месяцев с даты его изготовления. 9.3. Реагент после вскрытия флакона может храниться при температуре +2–8 ОС в темном месте в течение всего срока годности набора. 9.4. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора. Список литературы 1. McNeely M. Amylase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1112-1116. 2. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999. 3. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995. 4. Ying Foo A et al. Amilase measurement with 2-chloro-4nitrophenyl. 5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001. Производится ООО «Эйлитон» по заказу ЗАО «А/О Юнимед». По вопросам, касающимся качества набора «а-АМИЛАЗА –UTS», следует обращаться в ЗАО «А/О ЮНИМЕД» по адресу: 129301, Москва, ул. Касаткина, 3а; Тел. (495) 734-91-31, 8-800-333-91-31, Факс: (495) 564-86-41; E-mail: office@unimedao.ru; http://www.unimedao.ru | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Добавить документ в свой блог или на сайт
Похожие:
 | Днк gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, Lactobacillus spp и общего количества бактерий) в клиническом материале методом полимеразной... |  | Набор ветеринарных диагностических реагентов для определения активности холинэстеразы в крови животных |
| Присутствующая в крови амилаза выводится через почки и экскретируется в мочу. Следовательно, увеличение сывороточной активности отражается... | | Аст в сыворотке крови. Для дифференциальной диагностики большое значение имеет коэффициент Ритиса = аст/алт. В норме коэффициент... |
| Присутствующая в крови амилаза выводится через почки и экскретируется в мочу. Следовательно, увеличение сывороточной активности... | | Клиренс креатинина позволяет оценить скорость гломерулярной фильтрации, что позволяет лучше диагностировать почечные заболевания... |
| При появлении крови в моче безотлагательно необходимо обратиться к урологу и срочно пройти тщательную диагностику для выявления причины... | | Набор ветеринарных диагностических реагентов для определения содержания глюкозы в крови животных |
| Определение креатинкиназы используется в диагностике и мониторинге инфаркта миокарда и миопатий. Увеличение активности кфк может... | | Для большинства аутоиммунных заболеваний (аиз) характерно повышение содержания в сыворотке крови аат к нативной и (или) денатурированной... |